Метод тест-растений

26.06.2014

Идентификация некоторых видов и биотипов галловых и цистообразующих нематод очень сложна и трудоемка (срезы вульвы) из-за их значительного морфологического сходства. Относительно легче определять этих высокоспециализированных паразитов по способности к галло- и цистообразованию на специфических растениях-хозяевах, что в конечном итоге привело к созданию сортимента тест-растений. В частности, биотест для диагностики Hetero-dera schachtii разработан до такой степени точности, что дает не только количественную, но и качественную оценку зараженности почвы свекловичной нематодой.
Образец исследуемой почвы (2500 мл) смешивают с фунгицидом для защиты от болезней всходов (1,5 г ольпизана или тиурама 85) и засыпают в 15 чисто вымытых 7-сантиметровых горшков. В каждый горшок высаживают по два проростка сахарной свеклы, предварительно выращенных в почве, не содержащей нематод (8—10 дней, 15—18 °С). Контролем служат 15 горшков, содержащих почву с известной плотностью заражения. Для уменьшения потери влаги горшки можно поставить в пластмассовые поддоны или во влажную торфяную крошку; последнюю из-за опасности заражения нематодами используют только один раз.
В месте размещения горшков освещенность должна составлять не менее 10 000 лк при 14-часовом световом периоде, поэтому при проведении биотеста в период с ноября по февраль необходимо дополнительное освещение. Температура в течение светового дня — 18—22 °C, при темновом периоде — около 15—18 °С. Следует обеспечить равномерное снабжение растений водой, не допуская как переувлажнения, так и высыхания почвы. На 3-й и 5-й неделе от начала опыта растения подкармливают 0,3%-ным раствором полного удобрения. Для борьбы с вредителями (тли) проводят окуривание дихлофосом, опрыскивания инсектицидами следует избегать.
Оценку поражения проводят примерно через 8 недель путем подсчета цист на корнях с наружной стороны земляного кома, а при очень сильном укоренении — также на корешках, расположенных в глубине. Заселенность в пределах 30 цист требует точного подсчета, при наличии большего их числа результат обозначается величиной 30+. Если при полном отсутствии цист на поверхности исследуют корни, находящиеся внутри земляных комов, и обнаруживают на них более трех цист, необходимо провести повторную серию тестирования. Наличие в среднем менее трех цист на горшок указывает на слабую зараженность исследованной почвы, подсчет можно не проводить.
Заселенность яйцами и личинками каждых 100 г исследуемой почвы можно определить по средней арифметической из 15 отдельных показателей на горшок. Оценка 30+ учитывается при выведении средней как значение 30, при условии, что эта величина получена менее чем по 50% горшков. График расчета заселенности почвы яйцами и личинками по средним значениям числа цист приведен на рисунке 62, А. Если оценка более чем по 50% горшков составила 30+, то по этому значению оценивают всю серию, что соответствует наличию более 2500 яиц и личинок в каждых 100 мл почвы.

Аналогичный метод разработан Штельтером и Троммером для определения зараженности и оценки плотности популяции картофельной цистообразующей нематоды (Globodera spp.) в почвенных пробах.
В 15—17 горшков (предусмотреть два резервных горшка!) засыпают три литра исследуемой хорошо перемешанной почвы и высаживают по одному клубню картофеля. Если задача заключается лишь в обнаружении нематоды, следует выбрать сорт, восприимчивый ко всем патотипам, идентификация же патотипов требует применения соответствующих сортов-дифференциаторов. Биотест проводится с конца ноября до середины мая. Клубни с наклюнувшимися ростками к началу опыта дают дружные и ранние всходы.
В месяцы с коротким световым днем желательно (но необязательно) дополнительное освещение. При поддержании температур в пределах 12—22 °C и оптимальном водообеспечении результаты теста можно оценивать уже через два месяца в стадии желтого или белого окрашивания цист.
Подсчитывают все цисты на поверхности земляного кома, причем число их в пределах 50 устанавливается точно, а при наличии более 50 цист результат обозначается как 50+. Средняя из 15 отдельных значений принимается за основу оценки. С помощью графика, приведенного на рисунке 62, Б, по заселенности цистами определяют число личинок на 100 г почвы. Если по более чем 30% исследуемых горшков показатель составляет 50+, среднее значение также будет соответствовать 50+.
Этот тест позволяет получить достаточно точный для практических выводов количественный результат заражения нематодами в пределах 1000 личинок на 100 см3 почвы; популяции больших размеров такой оценке не поддаются.