Окрашивание нематод лактофенол-хлопковой синью или лактофенол-кислым фуксином

26.06.2014

Окрашивание паразитирующих в корнях нематод лактофенол-хлопковой синью или лактофенол-кислым фуксином проводится преимущественно в ориентировочных исследованиях. He полностью одревесневшие корни тщательно моют, подсушивают между двумя листами фильтровальной бумаги и погружают на 1—3 мин в кипящий раствор лактофенол-хлопковой сини (100 г фенола, 83 мл молочной кислоты, 100 мл дистиллированной воды, 160 мл глицерина, хлопковая синь). Продолжительность окрашивания зависит от состояния корней, концентрации красящего вещества (приблизительно 0,05—0,1%), а также от заданной интенсивности окраски. Затем корни промывают в воде и для осветления помещают в неокрашенный раствор фенола. Исследование корней, которые должны быть погружены в жидкость (лактофенол, вода), проводят под стереомикроскопом или микроскопом. Все стадии нематод приобретают интенсивный синий цвет, в то время как ткани растений, за исключением частично окрашивающейся меристемы корня, поглощают незначительное количество красящего вещества. Использование кислого фуксина обеспечивает интентивное красное окрашивание.
Этот простой метод быстро дает результаты, но более длительное (свыше 3 мин) тепловое воздействие может привести к морфологическим изменениям у нематод; кроме того, особи, лежащие глубоко в тканях, распознаются слабо. Для одревесневших или мощно развитых корней (диаметр более 1 мм) данный способ окрашивания непригоден.
Методы окрашивания применяют для обнаружения в корнях эндопаразитических нематод, например видов Meloidogyne, Globodera, Heterodera и Pratylenchus.
Примечание. В кипящий раствор лактофенола можно погружать только корни, хорошо обсушенные между двумя листами фильтровальной бумаги. Необсушенный материал дает брызги при погружении (носить защитную одежду!).