Перенос вирусов и МПО с помощью векторов
26.06.2014
Для обнаружения вирусов и изучения их свойств может возникнуть необходимость в переносе вирусов с помощью векторов. Переносимость определенным вектором является важным диагностическим признаком. Исследования по диагностике с использованием этого свойства вирусов связаны с определенными предпосылками, указанными ниже.
Экспериментальные работы начинают со сбора переносчиков из природных популяций. Сбор должен ставить задачей получение живых и неповрежденных особей. Для этого пригодны различные методы.
Сравнительно трудоемким, по очень целесообразным для сбора определенных переносчиков, например цикад, является применение эксгаустера, с помощью которого засасывают и собирают отдельных насекомых. Мелких и легко повреждаемых насекомых (тли, галловые клещи) лучше всего собирать вместе с частями растений, на которых они находятся в естественных условиях. Почки, листья или побеги помещают в закрытые марлей стеклянные пробирки или пленочные пакеты и в лаборатории извлекают вредителей. Наконец, для этих же целей пригодны светоловушки, с помощью которых в сумерках и ночью можно отлавливать летающих насекомых. Свободноживущих нематод, используемых в качестве векторов, отмывают из почвенных проб, отбирая их в разных точках и с разной глубины данного участка. Для отмывки пригодна аппаратура, предложенная Остербринком.
Векторы, используемые в опытах по диагностике вирусов, должны отвечать определенным требованиям: быть свободными от вирусов, относиться к одному виду и полу, достичь одной стадии развития.
Некоторые требования предъявляются и к растениям, используемым для разведения переносчиков, они должны быть свободными от вирусов и пригодными для питания и откладки яиц. Чтобы гарантировать отсутствие вирусов в растениях, желательно выбирать виды, не заражаемые теми патогенами, для диагностики которых используются данные переносчики. Например, для разведения тлей пригодна китайская. капуста (Brassica sinensis), не восприимчивая ко многим вирусам картофеля, зерновых, бобовых и плодовых культур.
Поскольку пригодность определенного вида растения для питания и откладки яиц не всегда совпадает, часто бывает необходимо использовать для разведения векторов несколько видов. Например, для цикадки Euscelis plebejus кормовым растением служат кормовые бобы (Vicia faba), а откладка яиц происходит на костре безостом (Bromus inermis). Кормовые растения следует выращивать и использовать в состоянии, при котором подопытные векторы всегда в достаточной мере обеспечены хорошим питанием.
При разведении векторов для каждого вида необходимо обеспечить условия, близкие к оптимальным. Так, для выращивания бескрылых тлей нужны хорошо вентилируемые помещения с молодыми растениями, которые растут при постоянном освещении и не слишком плотно заселены тлями. Очень разные требования к условиям среды предъявляют цикады. Для разведения тлей и цикад пригодны обтянутые марлей инсектарии с открывающейся передней стенкой. Размер их должен соответствовать высоте используемых в каждом случае кормовых растений. Для кратковременного содержания насекомых, например в течение времени, необходимого для передачи вируса, можно использовать растения в горшках, над которыми с помощью двух дуг натянута марля.
Нематод-переносчиков содержат во влажной (невысушенной, но и непереувлажненной) почве, по возможности в естественных условиях. Для этого пригодны бетонные кольца, углубленные в содержащую нематод почву примерно на 75 см. На участке высаживают кормовые растения для соответствующего вида нематод. Культуру фитопатогенных нематод можно поддерживать и в теплице, используя горшки с растениями, погруженные во влажный торф.
Грибы-переносчики лучше всего культивировать на корнях растений-хозяев. Их выращивают во влажном стерилизованном песке, из которого легко получить суспензию зооспор, в смеси песка с торфом или в стерилизованной почве.
Некоторые переносчики, например нематода Xiphinema diversicaudatum или цикадки, плохо выдерживают искусственное раз-ведение. Для экспериментальных целей их лучше всего собирать с естественно инфицированных растений.
Для переноса вирусов используют различное число особей одного вида вектора, чем больше это число, тем выше вероятность переноса. Например, при работе с тлями на одно индикаторное растение нужно не менее 10 особей.
Чтобы воспрепятствовать миграции векторов, особенно цикадок, во время эксперимента, испытываемые или индикаторные растения следует помещать в изоляторы или обтянуть марлей. Тлей и галловых клещей можно пересаживать прямо с кусочками листьев растений, зараженных вирусами.
