AS-тест

 26.06.2014

Для усовершенствования серологической диагностики вирусов картофеля X, Y, S и M Хаманн и Рунге разработали методику с использованием сульфата аммония. Его добавление к соку, помимо повышения способности вирусов к образованию осадка, вызывает коагуляцию низкомолекулярных белков и других мешающих серологической реакции веществ, которые затем удаляют путем центрифугирования на малых скоростях.
По 0,3 мл сока от каждой пробы, полученного с помощью вальцового пресса, помещают в пробирки и дозирующим шприцем добавляют по 0,3 мл 1,31%-ного раствора сульфата аммония. После инкубации в течение часа при 27 °C проводят центрифугирование в течение 20 мин при 2500—3000 g (по возможности — в центрифуге с охлаждением). Осветленный таким образом сок наносят на стеклянные палетки с подложенным шаблоном и стеклянной палочкой смешивают с антисывороткой (1:1). После трехчасовой инкубации при 27 °C и 100%-ной влажности воздуха считывают результаты при 60—70-кратном увеличении в темном поле микроскопа.
Преимущества AS-теста заключаются в следующем: 1) чистота реакционных смесей обеспечивает хорошую оценку результатов реакции; 2) реакция между антигеном и антителами протекает полнее, что позволяет обнаружить больше зараженных образцов, чем при тесте преципитации; 3) число неспецифических реакций резко снижается.
При использовании непрерывно работающих дозирующих пипеток и уменьшении числа контрольных капель с нормальной сывороткой на 50% AS-тест, дающий более достоверную диагностику, обеспечивает снижение затрат на 20 %.
Дальнейшим усовершенствованием этой методики является ASNA-тест. К 1,31%-ному раствору сульфата аммония добавляют 0,2% азида натрия, что дает возможность продлить инкубацию в течение ночи. Покрытие смешанных капель парафиновым маслом устраняет испарение, и в результате время инкубации можно продлить до 48—72 ч в зависимости от исследуемого материала, цели теста и концентрации вирусов. (Данный вариант методики сокращенно обозначается также ASNAP-тест, т. е. ASNA-тест под парафином.)