Преципитация (капельный тест)

 26.06.2014

Если для серологического анализа используется центрифугированный сок, то реакция между антигеном и антителами протекает без участия клеточных фрагментов. Образующиеся при этом хлопья называют преципитатом.
Образцы сока, полученные с помощью ручного пресса или путем гомогенизации в ступке, центрифугируют 20—30 мин при 2500—5600 g (по возможности — в центрифуге с охлаждением). Скорость вращения зависит от исследуемой комбинации вирус — хозяин. После центрифугирования капли сока наносят пипеткой, как и при TA, на предметные стекла или стеклянные пластинки. В каждую каплю добавляют равное количество антисыворотки или нормальной сыворотки и перемешивают капли стеклянной палочкой, доводя их диаметр до размера 10-копеечной монеты. После инкубации в течение 20—120 мин при 25 °C и 70—80%-ной влажности воздуха считывают результаты в темном поле микроскопа с освещением при 50—70Х. Показателем положительной реакции служит образование легких хлопьев преципитата.
Примечание. Данный тест обладает более высокой специфичностью и чувствительностью, чем тест агглютинации. Однако и здесь возможны неспецифические реакции, обусловленные действием содержащихся в некоторых растениях ингибиторов серологических реакций. Поэтому необходим контроль с использованием сока здоровых растений и нормальной сыворотки.
По преципитату невозможно различить разные фракции антигена. Кроме того, чтение результатов реакций преципитации в темном поле требует некоторого опыта, особенно при очень слабых реакциях из-за низкой концентрации вируса в соке. Как правило, чем прозрачнее сок, тем отчетливее преципитат. Следовательно, для различных комбинаций вирус — хозяин необходимы разные буферные растворы, добавки, режимы центрифугирования, которые определяют путем пробных анализов или находят в специальной литературе. При избытке одного из партнеров (например, избыток антител) происходит торможение реакции, что проявляется в форме так называемой профазы, т. е. на первых ступенях разведения образование преципитата не происходит.
Тест преципитации одинаково пригоден для диагностики сферических и палочковидных вирусных частиц.