Улучшение штаммов и сохранение вирулентности вирусов

21.06.2014

Оссовский высказал предположение о существовании штаммов вирусов с различной вирулентностью, поскольку равные концентрации ядерных полиэдров из различных пунктов вызывали неодинаковую смертность бабочки мешочницы, Kotochalia junodi. Вирусы ядерного полиэдроза кольчатых коконопрядов Malacosoma americanum, М. pluviale и М. disstria в равной степени инфекционны для М. disstria. Вирус ядерного полиэдроза из европейского вида М. alpicola действовал значительно медленнее, чем другие местные вирусы. Образцы гранулярных включений из двух рас Pieris brassicae обладали одинаковой вирулентностью, но восприимчивость различных линий хозяина колебалась.
Согласно Бергольду, возможно, что «неэффективные» вирусы, например вирус гранулеза еловой хвоевертки (Choristoneura fumiferanа) представлены мутантами с низкой инфекционностью. У некоторых вирусов насекомых известны штаммы, образующие полиэдры различной формы. Один штамм NPV Hyphantria сunеа, у которого полиэдры в форме тетраэдров, под микроскопом кажутся треугольными, оказался более вирулентным, чем «гексаэдрический» штамм, полиэдры которого кажутся четырехугольными. Хукухара и Хашимото и Хукухара нашли, что «тетрагональный» штамм был более вирулентен и, кроме того, гораздо быстрее размножался, чем «гексагональный», хотя серологически они не различались. Стейрс отобрал штамм вирус? гранулеза, образующий в С. futniferana только прямоугольные включения, но не сообщал о его вирулентности.
Проблему вирусных штаммов необходимо учитывать при стандартизации вирусных препаратов. Игноффо указывал, что колебание в результатах биоиспытаний может объясняться наличием разных штаммов вируса в образце. Он собрал образцы вируса из различных мест и в течение нескольких лет непрерывно проводил их через насекомых. Камерон предполагал, что причиной сильно колеблющейся смертности может быть автоматический отбор штаммов вируса в насекомом в природе. Аллен получил штамм NPV Heliothis с вдвое более высокой вирулентностью, хотя разработанные им методы детально не описаны.
Эти сообщения показывают, что в природных популяциях насекомых имеются штаммы вирусов с различной вирулентностью и они будут отобраны для микробиологической борьбы, но в лабораторных условиях свойства вирусного штамма, по-видимому, сохраняются неизменными

Изменение вирулентности

а) Пассажи через насекомых. Смирнов отобрал штамм NPV пилильщика Neodiprion sertifer с повышенной вирулентностью из первых личинок, погибших после инокуляции суспензией в концентрации 2*10в4 полиэдров в 1 мл. Во время последующих пассажей NPV Galleria mellonella его вирулентность с 1-го по 8-е поколение непрерывно возрастала и вызываемая им смертность достигала 88%, но с 9-го по 12-е поколение она сохранялась на уровне 75—80%. Вирулентность NPV непарного шелкопряда возросла в пять раз по сравнению с вирулентностью исходного штамма в результате серии пассажей через нового хозяина. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы решить, является ли увеличение числа вирусных пучков (на полиэдр) после серии пассажей более или менее общим влиянием.
Айзава сообщал о последовательных пассажах NPV, Bombyx mori через Galleria mellonella. Титр вируса гемолимфы зараженной огневки (при биоиспытании на Galleria) постепенно повышался и после 8-го пассажа достиг 4,0—5,0 (отрицательный логарифм ЛД50, т. е. каждой гусенице было инъецировано 0,003 мл разведенной гемолимфы, и разведение на уровне ЛД50 составляют 10в-4—10в-5). Зараженная гемолимфа Galleria была инфекционна также и для шелковичного червя, и ее титр (при биоиспытании на шелковичном черве) был примерно таким же, что и титр гемолимфы шелковичного червя, с типичным NPV шелковичного червя. Вирус, адаптированный к Galleria, был нейтрализован образованной в кролике антисывороткой к вирусу шелковичного червя, развившемуся в шелковичном черве. Форма сечения полиэдров исходного вируса шелковичного червя и во время первых пассажей через Galleria была почти гексагональной. После ряда проведений образовались тетрагональные полиэдры, а иногда наблюдались и треугольные.
Смирнов адаптировал NPV пилильщика Trichiocampus viminalis к Т. irregularis, причем произошло заметное усиление вирулентности адаптированного вируса.
Попытки культивировать NPV люцерновой желтушки, карадрины и шелковичного червя в куриных эмбрионах заканчивались неудачей. Однако после попеременного проведения NPV шелковичного червя через куколок шелкопряда и куриные эмбрионы был получен измененный вирус, образовавший тетрагональные полиэдры в куколках и гусеницах шелковичного червя. После дальнейшей серии пассажей число полиэдров уменьшилось и иногда обнаруживали треугольные полиэдры. Симптомы заболевания у зараженных личинок полностью изменились и очень походили на симптомы болезни, носящей название «ciear head». Однако инфекционность гемолимфы составляла 6,5—7,0 (ЛД50, отрицательный логарифм разведения, инъекция 0,005 мл на 1 гусеницу) и вирус по-прежнему нейтрализовался антисывороткой к исходному NPV шелковичного червя. Поскольку вирус для этого опыта выбирали только по форме полиэдров, его вирулентность не изменялась.
б) Ослабленный вирус. После пассажей NPV шелковичного червя, адаптированного к Galleria (BG-вирус), через Galleria в течение более 80 поколений его вирулентность для шелковичного червя понизилась. В таблице 68 показано снижение вирулентности BG-вируса при пероральном введении суспензии полиэдров только что отродившимся гусеницам шелковичного червя. Если куколкам шелковичного червя инъецировали надосадочную жидкость центрифугата гомогенизированных зараженных гусениц Galleria (т. е. свободный вирус), то его вирулентность была различной для разных линий шелковичного червя (таблица 69). В некоторых линиях вирулентность BG-вируса была слабой как при инъекции свободного вируса, так и при скармливании полиэдров. В этой связи нужно отметить следующее. Специфический NPV G. mellonella высоко инфекционен для вощинной огневки, но очень слабо заражает некоторые линии шелковичного червя при инъекции. Если вирус инъецируют куколкам шелковичного червя, то бабочки выходят и остаются здоровыми.

Однако у бабочек В. mori обнаруживали небольшое число полиэдров при отсутствии заметных симптомов болезни. NPV G. mellonella нейтрализуется антисывороткой к NPV шелковичного червя. Форма и величина полиэдров вирусов Bombyx и Galleria различны, но серо-логически вирусы родственны. Кроме того, если недавно отродившимся гусеницам шелковичного червя вводили сублетальную дозу полиэдров BG, а в более позднем возрасте — дозу ядерных полиэдров шелковичного червя, гусеницы переносили эти дозу.
Рисовая огневка, Chilo suppressalis оказалась восприимчивой к вирусу BG. Этот вирус был последовательно проведен через огневок (BGC-вирус), в результате чего при биоиспытании свободного вируса путем инъекции шелковичному червю выяснилось, что он ослаблен (таблица 69).
Когда энтомопатогенный вирус последовательно проводят через другое насекомое-хозяина, следует учитывать изменение вирулентности. Усиление вирулентности можно использовать в микробиологической борьбе, а ослабленный вирус — для борьбы с вирусными болезнями полезных насекомых, в частности шелковичного червя.