Голые вирусы (NIV)
21.06.2014
Из членистоногих выделено и описано около двадцати пяти голых вирусов. Все они, кроме трех, связаны с насекомыми. Голые вирусы отличаются наибольшим разнообразием хозяев. Они встречаются у насекомых из пяти отрядов (чешуекрылые, перепончатокрылые, двукрылые, жесткокрылые, прямокрылые) и у клещей Acarina. Один голый вирус, выделенный из долгоножки Tipula paludosa, заражает три вида жуков, семь видов двукрылых и двенадцать видов чешуекрылых. По данным автора, только NIV красного цитрусового клещика Panonychus citri был размножен для использования в качестве инсектицида. Цитрусовый красный клещик — единственный представитель клещей, известный в качестве восприимчивого хозяина NIV, но, может быть, это свидетельствует лишь об отсутствии попыток передачи его другим членистоногим. Несомненно, данные о других NIV (35 из 39 попыток перекрестной передачи NIV чуждым хозяевам были успешными) свидетельствуют, что круг хозяев может быть гораздо шире.
Гилмор и Манджер пользовались следующей методикой размножения NIV красного цитрусового клещика. Процедура размножения вируса была дополнением метода непрерывного размножения красных цитрусовых клещей, разработанного раньше для токсикологических и биологических исследований. Пищей клещей служили зеленые лимоны (диаметром 5 см), которые закладывали по 32 штуки в проволочные сетки (45x45 ом). Взрослым клещам (250 на 1 лимон) в течение 72—96 ч давали откладывать яйца (около 1800 яиц на лимон за 24 ч). Затем клещей переносили на свежие лимоны, и вся операция повторялась снова. Для переноса взрослых клещей применяли специально сконструированную колонку и воздушную струю. Лимоны, зараженные яйцами, выдерживали при 27 °C и 60—70%-ной относительной влажности в инкубаторах с 10 полками в каждом. Для размножения вируса клещей использовали в стадии протонимфы (через 9 дней после откладки яиц). Каждую полку с 32 лимонами опрыскивали 8 мл сильно распыленной суспензии, содержавшей 100 мкг растертых больных клещей в 1 мл. Минимальная доза для заражения составляла 2 мкг больных клещей в 1 мл, или количество вируса, выделенное из 0,05—0,1 клеща. В более поздних испытаниях клещей иногда удавалось заражать дозой 1 нг больных клещей на 1 мл воды с сахаром, которую скармливали клещам через инертную мембрану. Клещей, зараженных вирусом, и лимоны выдерживали при 21—35 °С. В момент максимального заражения (через 9—12 дней после инокуляции) на каждом лимоне питалось 300—500 больных клещей. Трупы зараженных клещей, живых клещей, сброшенные шкурки, паутину и другие остатки сметали кисточкой с поверхности лимонов, помещали в склянку, взвешивали и хранили при -20 °С. Зараженных клещей можно было хранить в виде замороженных глицериновых суспензий, или препаратов, высушенных лиофилизацией в вакууме, или химическим путем, при -25 °C более 46 недель. При хранении водных суспензий при 7 или 25 °C они через 10 недель полностью теряли инфекционность. После проверки разных условий хранения принято хранить больных клещей при -25 °C в неплотно закрытых сосудах над безводным CaCl2. При таком способе хранения в течение 66 недель заметного снижения инфекционности не происходило.
Средний выход с каждой полки (32 лимона) составлял 100 мг больных клещей, а наивысший достигал 250 мг. По сравнению с расходом инокулума выход вируса увеличивался в 125—312 раз. При производительности 50—100 г больных клещей в год (2,5*10в6 больных клещей в год) стоимость рабочей силы и материалов составляла 0,2—0,4 цента на 1 клеща (80—100 долл. за 1 г клещей).
