Вирус гранулеза (GV)
21.06.2014
В качестве хозяев для размножения GV использовались гусеницы более 20 видов чешуекрылых. Методы получения варьировали от использования собранных в природе гусениц лиственничной хвоевертки, Eucosma griseana до постоянной лабораторной культуры гусениц яблонной плодожорки, Cydia (Carpocapsa) pomonella. Из других хозяев для размножения GV использовали гусениц репной (Pieris rapae) и капустной (Р. brassicae) белянок, листовертки (Argyrotaenia velutinana); пихтовой хвоевертки (Choristoneura fumiferana); пихтовой листовертки-толстушки Choristoneura (Cacoecia) murinana и американской белой бабочки, Hyphantria сunеа; совок (Spodoptera exigua, S. frugiperda) и металловидки.
Описываемая технология производства была разработана Фальконом. Гусениц плодожорки непрерывно выращивали по измененному методу Диксона и др. Отродившихся гусениц выращивали по одной в коробочках для желе на 14,5 г на полусинтетичеекой среде Игноффо, модифицированной Хоуэллом. Восточная плодожорка, Grapholitha molesta, также восприимчива к GV плодожорки и может служить дополнительным хозяином. В течение 10 дней гусениц выдерживали при 20—26 °C в полной темноте, чтобы предотвратить вбуравливание в корм, затем каждая из них получала каплю воды, содержащую 1*10в7 капсул, т. е. около 2*10в8 капсул на 1 г гусениц. На этой стадии гусеницы находятся в 4—5~м возрастах, и средний вес их составляет 46 мг (40—58 мг). Капсулы (1,1*10в8 капсул/мл) вводили гусеницам через рот шприцем с дюймовой иглой № 25—27. Обработанных личинок выдерживали 2—3 дня при 20—26 °С. Для облегчения обработки и максимального снижения потерь вируса живых гусениц собирали и хранили при 4—6 °С, пока они не требовались.
Капсулы выделяли из больных личинок путем растирания их в порошок (с помощью стерильного гомогенизатора тканей) и дифференциального центрифугирования. Одновременно перерабатывали примерно 500 гусениц. В результате центрифугирования при малом числе оборотов (2 мин при менее 500 об/мин) удалялись остатки насекомых, а при высокой скорости (>10 000 об/мин; 30 мин) капсулы концентрировали и отделяли от надосадочной жидкости. Суспензии капсул доводили до стандарта под электронным микроскопом. Для подсчетов к определенному объему суспензии капсул добавляли определенное число частиц полистирол-латекса. Средний выход составлял около 10в9 капсул на гусеницу, или около 2*10в10 капсул на 1 г гусениц. При меньшем масштабе производства вируса в 1966 и 1967 гг. выход составлял соответственно 6,6*10в9 и 1,9*10в9 капсул на гусеницу. Выход капсул в 100—660 раз превышал расход инокулума. На основе выхода лабораторной продукции за 7 месяцев 1968 г. годовая производительность была исчислена в 140 000 гусениц, а стоимость без рабочей силы и накладных расходов в 0,3 цента за личинку.
