Разведение риккетсий в живых организмах

 21.06.2014

Связь с членистоногими

Риккетсии, связанные с насекомыми, относятся к группам Rickettsieae, Ehrlichieae и Wolbachieae. Виды Rickettsieae и Ehrlichieae в различной степени патогенные для вшей, блох и клещей, патогенны также для человека и других позвоночных. Виды Wolbachieae специфично связаны с членистоногими, но ни один из них не разводился в широких масштабах для использования в качестве микробиологического инсектицида. Два рода — Rickettsoides, развивающийся на поверхности кишечного эпителия, и Wolbachia, развивающаяся внутриклеточно, — относительно безвредны для их членистоногих хозяев. Два других рода Enterella и Rickettsiella — настоящие энтомофаги и потенциальные кандидаты на использование в качестве микробиологических инсектицидов, тем более, что круг их хозяев включает некоторых очень важных вредных насекомых.
Ряд видов комаров — Culex quinquefasciatus, С. fatigans, С. molestus, Anopheles quadrimaculatus и Aedes aegypti — восприимчивые к Enterella culicis или к очень близким видам Enterella. Несколько видов кокцинеллид (жуков-коровок) Stethorus чрезвычайно восприимчивы к E. stethorae. Около дюжины видов пластинчатоусых или близких к ним видов жуков восприимчивы к Rickettsielia melolonthae, выделенной первоначально из Melolontha melolontha. Пластинчатоусые жуки Popillia japonica, Phyllophaga anxia, P. ephilida и Amphimallon majalis восприимчивы к R. popilliae, первоначально выделенной из японского жука. Другие виды вредителей, долгоножка, Tipula paludosa и прямокрылые (Gryllus bimaeulatus, Acheta domesticus) восприимчивы соответственно к R. tipulae или R. grylli.
Виды Rickettsiella

Разведение Rickettsiella в двукрылых и жуках — вредителях запасов указывает на возможность замены личинок пластинчатоусых жуков постоянно доступными и легко поддающимися разведению хозяевами. Способы выращивания хозяев, используемые для размножения В. popilliae и методы отделения B. popilliae послужили основой следующей методики. Личинки, собранные в природе и инъецированные из расчета около 25 риккетсий на личинку, инкубировались при 27 °C в соответствии с разработанным способом разведения В. popilliae. Для подавления развития инъецированных бактерий применяли ауреомицин или пенициллин (20 мкг/личинку), которые не очень снижали вирулентность B. popilliae. Ho Rickettsiella оказалась чувствительной к действию дигидрострептомицина и сульфадиазина натрия. Для инокуляции почвы требовались гораздо большие дозы (около 7*10в8 риккетсий на 1 г почвы). После 35 дней инкубации больных личинок собирали, промывали в воде, перетирали и пропускали через центрифужный фильтр, используя целит. Из осадка от фильтрования с целитом приготовляли содержащую риккетсий водную суспензию и профильтровывали ее через фильтровальную бумагу. Риккетсий подсчитывали в темном поле микроскопа и хранили в холодильнике. После хранения в течение года при 4 °C или трех лет при -79 °C снижения активности отмечено не было. После трех лет хранения при 4 °C сохранялось 10в-5 первоначальной активности. Выход составлял 3,3*10в11 риккетсий на личинку или 75*10в12 риккетсий на 1 г личинок. При инъекции или инокуляции почвы выход увеличивался соответственно до 13*10в9 или в 29 раз.
Дальнейшие соображения по поводу массового размножения Enterella и Rickettsiella для использования в качестве микробиологических инсектицидов следует отложить до того времени, когда будут изучены их эффективность в борьбе с вредителями, осуществимость и рентабельность размножения и доказана их безвредность для позвоночных.