Производство грибных патогенов in vitro

 21.06.2014

Ферментация на полутвердых средах

Beauveria bassiana, Metarrhizium anisopliae и Acrostalagmus арhidum можно выращивать на полутвердых средах. Используемые среды и процессы аналогичны применяемым для ферментации на полутвердых средах В. thuringiensis. Для инокуляции отрубей применяют жидкий инокулум, который можно выращивать на многих средах, предназначенных для глубинной ферментации. Многие грибы предпочитают среды с кукурузной мукой, и, по опыту автора, такие среды требуются грибу A. aphidum. Для выращивания инокулума пригодна среда следующего состава (на 1 л): соевая мука — 10,0 г; кукурузная мука — 10,0 г; глюкоза — 15,0 г; NaCl — 5,0 г; CaCO3 — 2,0 г плюс дистиллированная вода до объема. Удовлетворительные результаты часто получают на полутвердых средах, сходных со средами для ВТ, но в этих случаях предпочтительно, а для A. aphidum — жизненно необходимо заменять в составе среды около половины отрубей кукурузной мукой. Поскольку развивающийся мицелий плотно связывает отруби, требуется обычно 1—2 раза перемешать ферментируемую массу до начала спорообразования. Чтобы вызвать споруляцию после обильного развития мицелия, нужно возможно быстрее подсушить культуры. Мюллер-Кёглер указывает, что, если этого не сделать, способность конидий к прорастанию снижается.
Для многих из этих грибов предпочтительна ферментация на полутвердых средах, поскольку в этом случае не требуется отделять конидии от отрубей. Смесь сухих конидий с отрубями относительно стабильна, но ее нельзя хранить долго.
Глубинная ферментация

При глубинной культуре многие энтомопатогенные грибы не образуют настоящих конидий. Вместо этого отлучают диморфные грибы с бластоспорами, их рассматривают как «дрожжевую фазу», заменяющую «мицелиальную фазу». Самшинакова сообщала об образовании бластоспор у Beauveria bassiana. Выход сухих бластоспор составлял в ее опытах 10—15 г на 1 л жидкой среды. Адамек получил примерно 18 г сухих бластоспор М. anisopliae на 1 л жидкой среды. Далмедж обнаружил бластоспоры в глубинных культурах A. aphidum.
Везина и др. сообщали, что патоген насекомых Aspergillus ochraceus образует настоящие конидии, что отмечено и для некоторых других несовершенных грибов. Бластоспоры, полученные в глубинной культуре, трудно сохранять, и они легко теряют жизнеспособность. Выращивание энтомопатогенных грибов в глубинной культуре было бы целесообразным, если бы удалось получать настоящие конидии. В этой области необходимо проделать еще много работы.