Световая микроскопия В. thuringiensis

 20.06.2014

Форма конечного кристалла несколько иная у каждой из разновидностей В. thuringiensis. У многих из них в световом микроскопе он имеет правильную бипирамидальную и явно кристаллическую форму. Однако в других случаях, особенно у некоторых изолятов var. thuringiensis (серотип I), кристалл имеет гораздо менее правильную форму, и в световом микроскопе ее трудно определить. Длина конечного кристалла часто превышает 1 мк, а ширина — 0,5 мк, и он может составлять примерно 30% сухого веса спорулирующей клетки. Поэтому он хорошо виден в световом микроскопе, и опытный исследователь без труда обнаруживает кристалл внутри спорулирующей клетки или в свободном состоянии вне спорангия после распада клеточной оболочки.
В мазках из лабораторных культур можно сравнительно легко отличить спору от кристалла. В мазках, фиксированных жаром и окрашенных крепким карболовым фуксином, нафталиновой синей, раствором Гимза, кристаллвиолетом или Викторией синей, видны интенсивно окрашенные кристаллы и овальные неокрасившиеся споры, контуры которых ясно видны благодаря их цветным краям. Относительно мягкими реактивами, например контрастным красителем при окраске по Граму, кристаллы окрашиваются плохо. Для исследования их внутри спорангиев лучше пользоваться фазово-контрастной микроскопией влажных препаратов, и в настоящее время многие исследователи действительно предпочитают этот метод изучения кристаллов. Ханней использовал нигрозин для негативной окраски, чтобы облегчить исследование кристалла внутри спорангия. Автор этой статьи считает, что, в частности, для обнаружения кристаллов в промышленных препаратах, содержащих много постороннего органического материала, пригоден метод окрашивания мазков, фиксированных жаром, крепким карболовым фуксином, и просмотра их в фазово-контрастном микроскопе. В этом случае кристаллы приобретают характерную способность преломлять свет, которая позволяет легко отличать их от аморфного материала, составляющего основной фон. Пользуясь этим методом, можно производить точные подсчеты спор и кристаллов в материале, который исключительно трудно анализировать другими методами, хотя пылевидные препараты и до сих пор представляют в этом отношении проблему.