Высокомолекулярные токсины: ферменты
20.06.2014
Различные грибные ферменты могут представлять значительный интерес в патологии насекомых. Они нередко выделяются в существенных количествах в культуральную среду и в организм хозяина, и в обоих случаях их можно выделить с помощью надежных методов, применяемых в химии белков. Поэтому их можно считать мощным средством проникновения в тело насекомого и переваривания тканей или гемолимфы. Так, можно ожидать присутствия в фильтратах культур энтомопатогенных грибов многих гидролитических ферментов. Хубер обнаружил у М. anisopliae и A. flavus сильный липолитический фермент (расщепляющий соевое масло), у М. anisopliae — гликогеназу, у A. flavus — протеолитический фермент, действующий на желатину; Cordyceps militaris, В. bassiana и A. flavus содержали протеолитический фермент, действующий на молоко и на активность уреазы; В. bassiana и A. flavus — значительное количество амилазы; у всех четырех грибов Хубер обнаружил слабую активность аспарагиназы. Выделение хитиназы в погруженных и стационарных культурах В. bassiana зависело от возраста культуры. Выделение в свободном состоянии N-ацетилглюкозамина из чистого хитина и из покровов гусениц вощинной огневки определялось путем титрования и хроматографии.
Йенссон изучал протеолитические ферменты 10 энтомопатогенных видов Entomophthora, из которых самый высокий выход фермента был у E. coronata; наилучшей оказалась среда на печеночном экстракте. Установлены повышение pH во время культивирования, и оптимальная температура, включая усиливающуюся ферментацию. Празертфон и Йендол и др. также сообщали о белковых токсинах, выделяемых энтомофторовыми грибами in vitro. Фильтраты культур E. coronata и E. apiculata при инъекции были токсичны для вощинной огневки, но фильтраты E. virulenta и E. thaxteriana оказались нетоксичными. Взрослые Musca autumnalis были восприимчивы к фильтратам культур E. coronata и E. virulenta.
Методом гельфильтрации Кучера и Самшинакова отделили в питательном бульоне протеазы В. bassiana от соединений с низким молекулярным весом. Они показали, что протеолитический комплекс, токсичный для G. melloneila, можно разделить на сефадексе G-75 на два компонента с разным молекулярным весом и разной степенью их ингибирования этилендиаминтетраацетатом (ЕДТА) (Кучера, неопубликованные данные). LD50 препарата токсической протеазы составляла при инъекции 90*10в-3 тирозиновых единиц протеолитической активности на гусеницу, что ставит этот препарат в ряды протеаз с умеренной токсичностью. Очевидно, протеазы могут представлять один из типов активного токсического компонента энзиматического комплекса; они очень быстро и специфическим образом повреждают некоторые основные физиологические функции, разрушая биологически активные белки. Исследование их свойств будет чрезвычайно полезно и может разрешить некоторые вопросы, касающиеся механизма патогенности грибов.
