07.11.2017
31.10.2017
21.10.2017
21.10.2017
21.10.2017
04.10.2017
04.10.2017
28.09.2017
01.09.2017
31.08.2017
Методы заражения почвы патогенными грибами
 26.06.2014

Оценку на патогенность возбудителя, изолированного из корней или проводящих сосудов, можно осуществить путем заражения почвы с последующим выращиванием одного из поражаемых сортов соответствующей культуры. Почву перед проведением заражения нужно продезинфицировать, чтобы последующее развитие болезни можно было однозначно связать с изучаемым возбудителем. По этой же причине следует выращивать контрольные растения в незараженной почве.

Дезинфекция почвы

Если необходимо большое количество почвы, дезинфекцию проводят в стандартном почвенном стерилизаторе, в котором почва в соответствии с рабочим режимом этого аппарата прогревается текучим паром 20—30 мин. После охлаждения ее хранят так, чтобы не произошло смешивания с недезинфицированной почвой, и быстро используют для оценки патогенности. Меньшие количества почвы можно дезинфицировать путем одночасового автоклавирования при 0,12 МПа или формалином. Разбавленным водопроводной водой формалином (1 : 20) поливают почву при ее перелопачивании, расход — 30 л/м3, затем почву укрывают на 2—3 дня воздухонепроницаемой пленкой. Перед использованием почву нужно еще раз перелопатить и несколько дней проветрить, чтобы улетучились остатки формалина. Дезинфекция почвы ртутьсодержащими протравителями или другими фунгицидами не рекомендуется из-за возможного последействия химикатов на инфекционный материал.
Заражение с помощью покрытых мицелием зерен

Применение заселенных мицелием зерен для заражения почвы — очень простой метод, имеющий три преимущества. Во-первых, питательный субстрат пригоден для культивирования многочисленных видов грибов, дешев и доступен в огромных количествах. Во-вторых, он пригоден для массового получения инфекционного материала тех патогенов, которые in vitro не образуют совсем пли дают мало спор. В-третьих, заселенное мицелием зерно можно в дозированных количествах рассыпать по почве или заделать в нее.
Приготовление питательного субстрата проводят по методу, описанному ранее. После посева возбудителя создают оптимальный температурный режим для разрастания мицелия, ускоряя этот процесс повторными встряхиваниями сосудов с культурой гриба. Размеры сосудов определяются потребностями в количестве инфекционного материала, которое при оценке на патогенность, как правило, незначительно. Для этих целей пригодны стеклянные банки емкостью 200 мл. Заросшие мицелием зерна смешивают с дезинфицированной почвой.
Данные о патогенности и агрессивности инфекционного материала обычно отсутствуют, поэтому нужно иметь различные варианты смешивания, например с отношением зараженные зерна : почва (по объему) как 1:1, 1:3, 1:5, 1:10. Внесение большого количества инфекционного материала с высокой агрессивностью может привести к отмиранию растений еще до образования на них соответствующих симптомов поражения. В то же время при слишком малом количестве инокулюма и слабой агрессивности патогена симптомы вообще не появляются.
Зараженной почвой наполняют сосуды, например горшки или чашки, высевают или высаживают в них растения и выращивают в оптимальных для патогена условиях (свет, температура и влажность воздуха). Учет начинается после появления симптомов. Продолжительность инкубационного периода в оптимальных условиях окружающей среды и при использовании восприимчивых тест-растений зависит от свойств возбудителя и в большинстве случаев не превышает 2—3 недель.
Заражение суспензией спор

Заражение почвы грибами, обильно спорулирующими in vitro (например, видами Fusarium), можно проводить путем полива суспензией спор. Патоген выращивают на питательной среде, благоприятной для спорообразования. Поскольку при оценке патогенности, как правило, нужно немного инфекционного материала, для выращивания вполне пригоден косой агар в пробирках. Споры собирают, снимая шпателем воздушный мицелий или заливая культуру водой и встряхивая ее для ускорения выхода спор, например из пикнид. Этот процесс легче осуществляется в пробирках, чем в чашках Петри или маленьких колбах. Для сравнения агрессивности нескольких изолятов необходимо определить концентрацию споровой суспензии, используемой для заражения. Суспензию вносят, как правило, после посева тест-растений. Концентрация суспензии, необходимое ее количество и время внесения меняются в зависимости от возбудителя. В специальных случаях нужные данные берут из литературы или устанавливают опытным путем, применяя соответствующую методику.
Вместо заражения почвы патогенность изучаемых возбудителей можно определить путем обмакивания корней и суспензию спор или при проращивании тест-растений на агаре, заросшем патогеном.