07.11.2017
31.10.2017
21.10.2017
21.10.2017
21.10.2017
04.10.2017
04.10.2017
28.09.2017
01.09.2017
31.08.2017
Методы определения размеров спор
 26.06.2014

Определение размеров спор необходимо в первую очередь при разделении отдельных видов грибов в пределах рода. Его проводят с помощью окуляр-микрометра, вложенного в окуляр и имеющего 100 делении. Размеры, спор в поле микроскопа меняются в зависимости от выбора объектива, но окуляр-микрометр размещен выше системы линз и имеет постоянную шкалу, поэтому он пригоден для работы с разными объективами и при различном увеличении. Окуляр-микрометр нужно подбирать соответственно микроскопу, каждому объективу и каждому лаборанту, т. е. он требует калибровки; если во время измерения объектив меняют, то калибровку проводят заново.

Калибровка окуляр-микрометра

Цена деления окуляр-микрометра устанавливается следующим образом. Окуляр-микрометр вводят в окуляр, затем на столик микроскопа вместо препарата помещают объект-микрометр и, выбрав требуемое увеличение, устанавливают на резкость. Объект-микрометр представляет собой шкалу со 100 делениями, расположенными в 10 мкм (0,01 мм) друг от друга. С его помощью определяют деления окуляр-микрометра. Сначала совмещают два любых деления обеих шкал, затем ищут отрезок, на котором опять совпадают два деления обеих шкал, и рассчитывают соотношения.
Методы определения размеров спор

Например, 17 делений объект-микрометра совпадают с 40 делениями окуляр-микрометра. Следовательно, 40 делений окуляр-микрометра соответствуют 170 мкм (17 х10 мкм). Расстояние между двумя делениями на окуляр-микрометре составляет 4,25 мкм (170:40). Этот расчет повторяют еще два раза, совмещая любые другие деления (рис. 44). В заключение из всех трех значений, которые в приведенном примере лежат между 4,25 и 4,30 мкм, рассчитывают среднее значение, которое и используется в качестве окончательной цены деления.
Этот показатель действителен только для данного микроскопа при применении объектива, используемого для калибровки, и для лаборанта, проводившего калибровку.
Измерение спор

Для измерения спор сначала готовят водный препарат (суспензию спор). Затем его помещают на предметный столик таким образом, чтобы линейка окуляр-микрометра проходила над спорой по продольной или поперечной ее оси (длина или ширина), подсчитывают деления окуляр-микрометра от одного конца споры до другого и умножают их число на цену деления. Как правило, измеряется самый большой диаметр в длину и в ширину, так как споры не всегда равномерны. Показатели других измерений, например отростков, также должны быть записаны. Изогнутые споры, например конидии Fusarium, измеряют от верхушки до верхушки (рис. 45).
Методы определения размеров спор

Чтобы получить среднее значение, а также определить размах вариабельности от самой маленькой до самой большой споры, измеряют не менее 100 спор. В целом следует учитывать, что чем вариабельнее и разнообразнее споры, тем больше число обязательных измерений. Если споры разных видов сходны друг с другом, то для точного определения принадлежности возбудителя к одному из этих видов также необходимо большое число измерений.
Чтобы уменьшить затраты труда, целесообразно вначале собрать показатели окуляр-микрометра и лишь при статистической обработке провести перерасчет по цене деления.
Примечание. При измерении спор следует иметь в виду, что споры из гербарного материала меньше по размеру, чем на свежем материале. Поэтому, чтобы получить сопоставимые результаты, суспензию надо предварительно быстро прокипятить в концентрированной молочной кислоте. Размер спор, полученных in vitro, варьирует в зависимости от питательного субстрата; как правило, они несколько крупнее, чем образовавшиеся на растении-хозяине.