08.08.2017
14.07.2017
06.07.2017
19.06.2017
19.06.2017
19.06.2017
15.06.2017
12.06.2017
12.06.2017
16.05.2017
Стимуляция спорообразования с помощью питательного субстрата
 26.06.2014

При использовании питательного субстрата в качестве стимулятора споруляции следует различать три возможности. Во-первых, некоторые возбудители болезней реагируют образованием спор на бедный питательными веществами субстрат («голодные» питательные среды). Количество спор при этом, как правило, незначительное, но его достаточно для идентификации. Например, при переводе Sclerotinia sclerotiorum на водный агар (1000 мл дистиллированной воды, 20 г агара) этот гриб образует одноклеточные бесцветные конидии.
Вторая возможность — использование растительных субстратов (кусочки стеблей или соломы); их автоклавируют в закрытых культуральных сосудах (чашки Петри, пробирки, колбы Эрленмейера на 50 или 100 мл) и затем инфицируют. В процессе стерилизации некоторые органические вещества субстрата разрушаются или преобразуются, но он остается «подобным растению», что в некоторых случаях стимулирует спорообразование. Неавтоклавированный растительный субстрат значительно активнее способствует спорообразованию, но недостатком такой среды является сильное загрязнение, что осложняет идентификацию исследуемого возбудителя и уменьшает продолжительность использования культуры. Этот метод используется в специальных случаях, например при выявлении Phytophthora infestans путем перевода на клубни картофеля.
Третья возможность состоит в применении специальных питательных сред. Вызвать с их помощью спорообразование у грибов, не спорулирующих на стандартных питательных средах, удается гораздо реже. Примером служит использовапие пептонсодержащих питательных субстратов (солодо-пептонный или глюкозо-пептонный агар) для определения некоторых видов Drechslera (Helminthosporium), поражающих злаки. Чаще всего специальные среды используют для стимуляции массового образования спор уже после начала споруляции. К этому методу прибегают в тех случаях, когда необходимо иметь споровый материал в огромных количествах, например для проведения искусственного заражения при установлении патогенности. В качестве примера можно привести перевод Fusarium culmorum, на агар Докса для массового получения конидий или на минеральные питательные среды с добавлением лактозы для образования хламидоспор.
Одним из немногих примеров образования фитопатогенными грибами половых форм плодоношения является культура представителей рода Pythium на «голодных» питательных средах.
Стимуляция образования органов полового размножения у представителей рода Pythium. Для идентификации видов Pythium мицелий, изолированный из больных частей растения, переносят в чашки Петри с агаризованным кукурузным экстрактом и выдерживают в темноте при 20—22°С. Через 4—7 дней на субстрате, служащем «голодной» питательной средой, образуются оогонии и антеридии, морфологические признаки которых, а также взаимодействие друг с другом можно использовать в качестве критерия идентификации. При дальнейшем культивировании (до девяти дней после посева) образуются также ооспоры, которые существенно облегчают точное определение патогена. Микроскопический контроль образующихся органов провести очень просто: тонкий кусочек агара размером 2 мм2 из чашки Петри переносят на предметное стекло, добавляют каплю ледяной уксусной кислоты с хлопковой синью и накрывают покровным стеклом. Препарат осторожно проносят над пламенем бунзеновской горелки для расплавления агара, затем его можно просмотреть под микроскопом.
Получение аскоспор возбудителя прикорневой гнили зерновых (Gaeumannomyces graminis) по Кноту. Корни растений пшеницы в фазе 9—10,5 по Фикесу (незадолго до выколашивания) тщательно промывают в. воде, разрезают на кусочки длиной 4 см и мокрыми закладывают в колбы Эрленмейера емкостью 300 мл, наполняя их примерно на две трети. После 20-минутной стерилизации при 0,15 МПа и посева колбы выдерживают 4—6 недель при 18—20 °C и дневном освещении. За это время образуется обильный мицелий и перитеции. Для получения аскоспор в колбы доливают стерильную воду, через 2 ч хорошо взбалтывают, сливают споровую суспензию и используют ее по назначению.