08.08.2017
14.07.2017
06.07.2017
19.06.2017
19.06.2017
19.06.2017
15.06.2017
12.06.2017
12.06.2017
16.05.2017
Определение спорообразования
 26.06.2014

Выделив грамположительные бактерии, часто приходится устанавливать, способны ли они к спорообразованию. Как правило, спорообразующие бактерии не являются возбудителями болезней. Признак спорообразования можно установить физиологическим путем (по устойчивости спор к высокой температуре) или с помощью микроскопических препаратов.
Тест с нагреванием. Из двух-трехдневной культуры на косом агаре небольшую порцию исследуемого материала переносят в пробирку с 3 мл питательного бульона (pH 7,0), пробирку помещают на 10 мин в водяную баню при 70—80 °C и затем инкубируют при 28 °C в течение 24 ч. Контролем служит пробирка с инокулированным, но непрогретым бульоном. Если после инкубации появляется отчетливое помутнение бульона, исследуемая бактерия относится к числу спорообразующих.
Микроскопическое определение спорообразования. Споры в бактериальных клетках можно обнаружить в окрашенных препаратах. Во многих случаях для этого достаточно окрашивания метиленовой синью или карболфуксином, а также по Граму, но есть и специальные методы окрашивания спор.
1. Окрашивание по Виртцу: подсушенный на воздухе и фиксированный нагреванием мазок покрывают 5%-ным раствором малахитовой зелени, затем осторожно нагревают предметное стекло над пламенем горелки до полного испарения красителя.
Добавление и испарение красителя повторяют несколько раз до появления пленки с металлическим блеском. Избыток краски смывают 2—3 мин под струей водопроводной воды. Затем препарат помещают в стакан с водой еще на 4—5 мин. После высушивания на воздухе или фильтровальной бумагой проводят контрастное окрашивание 10%-ным раствором сафранина (10 мин), вновь промывают препарат водопроводной водой, осторожно обсушивают и просматривают с масляной иммерсией. Споры окрашиваются в зеленый цвет, вегетативные части клетки — в красный.
2. Окрашивание по Мёллеру: высушенный на воздухе и фиксированный теплом мазок покрывают карболфуксином, нагревают над слабым пламенем горелки до образования пузырьков и промывают 96%-ным спиртом до полного удаления остатков красителя. После промывания водопроводной водой и подсушивания препарат контрастно окрашивают метиленовой синью (1 часть маточного раствора и 9 частей дистиллированной воды) и просматривают с масляной иммерсией. Споры окрашиваются в красный цвет, вегетативные части клеток — в синий.