27.04.2018
27.04.2018
11.04.2018
11.04.2018
10.04.2018
06.04.2018
02.04.2018
17.03.2018
06.03.2018
06.03.2018
Окрашивание по Граму
 26.06.2014

При идентификации многих фитопатогенных бактерий решающим показателем является окрашивание по Граму. Этот дифференцирующий признак основан на различиях в строении оболочки бактериальных клеток. К грамположительным прежде всего относятся виды Corynebacterium, в то время как большинство других фитопатогенных бактерий реагирует на окрашивание отрицательно. Методика окрашивания состоит в следующем.
— Приготовление мазка па обезжиренном предметном стекле, его высушивание на воздухе и фиксирование нагреванием.
— Нанесение на мазок капли карболового раствора генцианвиолета (торговый препарат или 10 мл насыщенного спиртового раствора генциан-виолета + 90 мл 2,5%-ного фенола), инкубация в течение 2—5 мин.
— Сливание красящего раствора и нанесение на предметное стекло раствора Люголя (торговый препарат или 2 г KI растворить в небольшом количестве дистиллированной воды, добавить 1 г йода и довести объем до 300 мл).
— Промывка 96%-ным спиртом (в химическом стакане) до полного исчезновения следов краски.
— Высушивание (иногда не проводится).
— Контрастное окрашивание карбол-фуксином (маточный раствор или его разведения) в течение 1—2 сек. Карбол-фуксин можно заменить 1%-ным сафранином, увеличив время окрашивания до 3—5 мин.
Далее препарат тщательно промывают в водопроводной воде и высушивают на воздухе.
Результаты окрашивания по Граму можно установить только при хорошем освещении (принцип освещения по Кёлеру), используя иммерсионный объектив и полностью открыв диафрагму. Грамположительные микроорганизмы окрашиваются в темно-синий цвет, грамотрицательные — в бледно-розовый или светло-красный.
Примечание. Для контроля качества окрашивания, подбора концентраций красящих растворов и времени окрашивания настоятельно рекомендуется использовать какой-либо вид бактерий с четко выраженной грамположительной реакцией, например Escherichia coli.