04.10.2017
04.10.2017
28.09.2017
01.09.2017
31.08.2017
08.08.2017
14.07.2017
06.07.2017
19.06.2017
19.06.2017
Приготовление и окрашивание мазка
 26.06.2014

Использование фазово-контрастной методики предполагает наличие соответствующего микроскопа и приготовление свежих препаратов. Окрашивание состоит из следующих этапов.
Приготовление мазка. Раздавленный растительный материал (пораженная ткань) или культуру микроорганизмов с помощью петли переносят в каплю водопроводной воды на обезжиренном предметном стекле (для обезжиривания стекла выдерживают в хромпике или протирают бензином, ксилолом, смесью соляной кислоты со спиртом) и растирают равномерно по площади 3x1,5 см. При этом надо следить за тем, чтобы плотность бактериальной суспензии была не выше необходимой для слабого помутнения.
Воздушная сушка и фиксация. Полученный мазок высушивают на воздухе и фиксируют путем нагревания. Для этого предметное стекло берут пинцетом или каким-нибудь держателем и мазком вверх трижды медленно проводят через светящуюся часть пламени бунзеновской горелки.
Окрашивание. После фиксации предметное стекло кладут горизонтально на планшет для окрашивания и каплями наносят на мазок фильтрованный раствор соответствующего красителя. Красящий раствор должен покрывать все предметное стекло.
Методы окрашивания и красители. Для быстрого окрашивания бактериальных мазков пригодны основные анилиновые красители. Особенно рекомендуется окрашивание метиленовой синью по Лёффлеру. Вначале готовят насыщенный спиртовой раствор красителя, который можно хранить длительное время. Непосредственно перед окрашиванием 30 мл этого раствора смешивают с 70 мл 0,01%-ного раствора КОН. Время окрашивания составляет 5—8 мин.
При окрашивании карболфуксином по Цилю и Нильсену используется насыщенный спиртовой раствор основного фуксина. Для приготовления красящего раствора 1 часть маточного раствора смешивают с 5%-ным раствором фенола. Время окрашивания — 0,5—1 мин.
Удаление красящего раствора и очистка мазка. После окончания окрашивания красящему раствору Дают стечь с предметного стекла, остатки смывают водопроводной водой. Мазок высушивают на воздухе или удаляют капельную жидкость фильтровальной бумагой. Следы красителя на рабочем столе или на руках можно удалить подкисленным спиртом.
Наблюдение. Окрашенные препараты рассматривают с применением иммерсионных объектов с высокой апертурой. Для этого пригодны ахроматы и апохроматы с увеличением 90x—100x или аналогичные объективы. В качестве иммерсионной жидкости используется имеющееся в продаже иммерсионное масло с показателем преломления nD 1,515.
На окрашенных препаратах определяют: наличие бактерий в препарате; форму бактериальных клеток (округлая, палочковидная, нитевидная и др.); размеры клеток (длина, ширина); вид агрегации (отдельные клетки, группы, зооглеи и т. д.).