01.09.2017
31.08.2017
08.08.2017
14.07.2017
06.07.2017
19.06.2017
19.06.2017
19.06.2017
15.06.2017
12.06.2017
Стерилизация оборудования, питательных сред, растительного материала
 26.06.2014

Важнейшим условием проведения всех работ в микробиологии является стерильность применяемого при этом оборудования и материалов. Проводить исследования рекомендуется в небольшом помещении, желательно с моющимися стенами, с газом и водопроводом, которое легко содержать в чистоте. Стерильность оборудования и материалов достигается следующими способами: отделением микроорганизмов в живом состоянии от субстрата, подлежащего стерилизации, например фильтрацией растворов сахаров; полным уничтожением микроорганизмов соответствующими методами.

Стерилизация путем разделения субстрата и микроорганизмов

Этот метод стерилизации применяется в тех случаях, когда ставится задача сохранить стерилизуемый субстрат неизмененным. Например, путем фильтрации можно добиться того, чтобы микробиальные клетки задержались мельчайшими порами. Для этой цели хорошо подходит выпускаемый промышленностью стеклянный бактериальный фильтр, в корпус которого, сделанный из иенского приборного стекла, впаяны пластины с порами различного размера. Очистка использованного фильтра проводится сильной струей воды. Только когда пропускная способность фильтра заметно снижается, фильтрующую пластину заливают слегка подогретой концентрированной серной кислотой, к которой добавлено немного KNO3, и оставляют на ночь. На следующий день фильтры промывают водой до полного отсутствия ионов SO4: после добавления к промывной воде нескольких капель раствора ВаСl2 не должно быть никакого помутнения.
Кроме того, применяются различные фильтры из асбеста, коллодия и других материалов.
Стерилизация путем полного уничтожения микроорганизмов

При методе стерилизации микроорганизмы, находящиеся на инструментах, оборудовании и в питательных средах, уничтожают высокими температурами, химическими средствами или физическими факторами.
Стерилизация сухим жаром

Прокаливание в пламени бунзеновской горелки пригодно прежде всего для металлических инструментов, в частности инокуляционных петель и крючков, препаровальных игл до и после употребления.
Обжигание игл, пинцетов, ножниц, скальпелей, предварительно погруженных б спирт, также применяется для стерилизации. Перед использованием для выделения возбудителей или в инфекционных опытах обжигать можно и погруженные в спирт плоды, клубни, семена. Этот способ используют, кроме того, для стерилизации краев культуральных сосудов (колб, пробирок), ватных пробок, металлических и стеклянных крышек.
Стерилизация горячим воздухом проводится в электрических сушильных шкафах, ассортимент которых весьма многообразен. Перед закладкой в сушильный шкаф все предметы (чашки Петри, пипетки, стеклянные шпатели и др.) помещают в специальные металлические бюксы или заворачивают в бумагу. Двухчасовое воздействие температурой 150—160 °C обеспечивает 100%-ное уничтожение всех микроорганизмов (время стерилизации увеличивается при постепенном повышении температуры!). Следует следить за тем, чтобы закладываемые в стерилизатор предметы были сухими. Повышение температуры и охлаждение должны идти постепенно, поэтому сушильный шкаф следует открывать только после полного охлаждения содержимого.
Влажная стерилизация

Действие высоких температур на микроорганизмы усиливается влажностью, поскольку коллоиды плазмы возбудителей существенно более чувствительны к сочетанию этих факторов.
Стерилизация текучим паром — наиболее распространенный метод обработки питательных сред, при котором стерилизуемый материал вступает в непосредственный контакт с текучим паром. Однако температуры, достигающей только 98—99 °С, недостаточно для уничтожения спор бактерий. Кроме того, слишком длительное нагревание приводит к изменению питательного субстрата. Поэтому применяют фракционированную стерилизацию, представляющую собой уничтожение контаминирующих микроорганизмов путем повторных кратковременных обработок. Как правило, желаемую стерильность обеспечивает трехкратное пропаривание по 20 мин с интервалами от 12 до 24 часов.
Метод стерилизации сжатым насыщенным паром связан с применением автоклава (стерилизация под давлением). В большинстве случаев обработка длится 30 мин при давлении 150 кПа, что соответствует температуре 125 °C. Стерилизацию сред, содержащих сахара или витамины, следует проводить осторожно, используя дробно текучий пар. Стерилизация под давлением пригодна для обработки солевых растворов воды, пептонных и других агаризованных питательных сред.
Для стерилизации небольших количеств питательных сред, воды и др. можно применять также кастрюли-скороварки. Их большое преимущество — сравнительно низкая стоимость и быстрота стерилизации (вследствие быстрого повышения и сброса давления экономится примерно 50% времени).
Химические методы стерилизации

При работе с микроорганизмами их не всегда удается уничтожить термическим путем. В таких случаях можно использовать химические методы стерилизации.
Хлорная известь, содержащая в качестве действующего-вещества гипохлорит кальция, пригодна для уборки лабораторных помещений и особенно для уничтожения старых культур.
Спирт в концентрации 70—80% может быть использован для стерилизации рабочих столов, ножниц, игл, резиновых пробок и др., а также плодов, клубней, и семян (погружение в спирт и последующее обжигание).
Сулема — ртутный препарат (HgCl2), поступающий в смеси с поваренной солью в продажу в виде таблеток красного цвета, употребляется как 0,1%-ный раствор для поверхностной дезинфекции растительного материала. Для этого же пригоден гипохлорит натрия (NaOCl).
Стерилизация ультрафиолетовыми лучами

УФ-лучи предотвращают прорастание спор грибов и уничтожают бактерии. УФ-облучатели различного типа применяют для стерилизации воздуха и рабочих мест, особенно когда нет закрытого стерильного помещения для проведения микробиологических работ.