Флуоресцентно-микроскопическая диагностика МПО

26.06.2014

Для флуоресцентно-микроскопического исследования необходимы максимально тонкие срезы побегов и черешков листьев. Срезы тканей толщиной около 10 мкм несколько часов фиксируют в 5%-ном растворе глутаральдегида в фосфатном буфере (pH 7,2). После 30-минутного окрашивания в 4,6-диамидин-2-фенилиндоле (pH 7,2) срезы промывают в 2,4-миллимолярном растворе MgCl2 (pH 5,4), окрашивают 2 сек в берберин-сульфате, быстро ополаскивают в дистиллированной воде, мокрыми переносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Пробы просматривают в световом микроскопе с применением конденсатора падающего света и системы светофильтров, состоящей из фильтра-возбудителя, цветоделителя и фильтра-пробки. Источником света служит ртутная лампа 200 В.
Если у здоровых растений наблюдается вторичная флуоресценция клеточных ядер (слабое светло-голубое свечение), цитоплазмы и пластид (желтовато-зеленая флуоресценция), а также клеточных стенок, то у зараженных растений появляется сильная вторичная флуоресценция флоэмной ткани. Цвет ее — все переходы от голубого до желтовато-белого в зависимости от концентрации МПО и степени поражения ситовидных трубок. Таким образом, флуоресцентно-микроскопический метод позволяет оценивать степень поражения МПО. При проведении анализов следует использовать специальную литературу.