07.11.2017
31.10.2017
21.10.2017
21.10.2017
21.10.2017
04.10.2017
04.10.2017
28.09.2017
01.09.2017
31.08.2017
Разработка системы биоиспытаний микробиологических инсектицидов и повышений ее точности
 21.06.2014

Из вышеприведенных рассуждений становятся очевидны три логических этапа в разработке системы биоиспытаний: испытание метода, установление воспроизводимости результатов и решение вопроса о наилучшем использовании системы.
Рисунок 46 построен для того, чтобы было легко сопоставить точность на каждом этапе, а для вычисления важнейших величин (ЭД50 и b) можно рекомендовать ускоренные методы Личфилда и Вилкоксона. Одни исследователи привыкли к выражению точности в доверительных пределах, другие — в показателях чувствительности, т. е. в разнице между двумя продуктами, обнаруживаемой при испытаниях. Для последних в таблицу 57 включены наименьшие различия между отношениями активности, достоверные при 5% -ном уровне.

Исходная методика

Материалы раздела V Б позволяют выбрать методику, обеспечивающую минимум колебаний результатов при разумной затрате рабочего времени и материалов. Сначала методику можно испытать на пяти или большем числе доз одного продукта. Как только при испытании будет достигнута смертность с значениями, достаточно симметрично расположенными вдоль линии ЭД50, можно оценить степень совпадения точек с линией на графике. При обнаружении гетерогенности нужно попытаться улучшить методику, исследовав такие факторы, как точность дозы, получаемой отдельными особями, и вероятность систематической ошибки оценки — может быть размеров или активности — насекомых, распределенных между дозами (в идеальном случае такое распределение между вариантами должно быть случайным).
Сравнение на этом этапе с рисунком 46 покажет, достаточное ли число насекомых было использовано для обеспечения намеченной точности при значении b, полученном в начальном испытании. Если наклон невелик, а объем работы не должен превышать нормы, может оказаться необходимым попытаться увеличить наклон, изменив методику, например температуру, возраст насекомого, корм или продолжительность воздействия. Кроме того, может быть полезным исследовать факторы, влияющие на аппетит насекомых или на равномерность распределения патогена в корме.
Воспроизводимость результатов

Следующим этапом является сравнение испытываемого образца с другим образцом, принятым за стандарт, повторив это сравнение несколько раз. Наклоны (b) линий для стандарта и испытываемых материалов в одном испытании могут отличаться. Поэтому линии для каждого материала нужно строить независимо одну от другой до тех пор, пока опыт работы с этой системой не покажет, достоверны ли колебания b. Если колебания недостоверны, параллельные линии можно подогнать. Наклоны, вероятно, больше колеблются от одного испытания к другому, поскольку партии насекомых неодинаковы, и, таким образом, в последовательных испытаниях линии следует также вычерчивать независимо, пока не будет накоплен опыт.
Если разница между отношениями активностей повторностей велика, необходимо исследовать такие технические стороны, как воспроизводимость условий испытания, физиологическое состояние насекомых, возможность разрушения патогена раньше чем он достигнет насекомого, pH суспензий патогена и др.
Эти различия достаточно велики, чтобы оправдывалось подобное исследование, если стандартная ошибка среднего логарифма отношений активностей
Sм- = √∑М2-(∑М)2/k/k(k-1)

значительно превышает оценку Sм-, полученную из ошибки в рамках испытания
Sм- = ∑(sМ)/k√k,

где M — логарифм отношения активностей;
M- — средний логарифм отношения активностей;
∑ — знак суммы и k — число сравниваемых отношений активностей. Ускоренные методы Личфилда и Вилкоксона не позволяют вычислить стандартных ошибок логарифма отношения активностей (sМ), но их легко вычислить по фидуциальным пределам отношений активностей, пользуясь формулой
SМ = 1/1,96 log (верхний предел)/(отношение активностей).
Конечная форма испытания

После того как будет установлена воспроизводимость испытания, можно по графику на рисунке 46 выбрать наилучшую комбинацию числа насекомых и числа повторностей для стандартизации испытуемого микробиологического инсектицида с требуемой степенью точности.
Поскольку наклон кривой b играет такую решающую роль, следует подумать, насколько его можно увеличить. Из патогенов, указанных в таблице 59, все способные заражать насекомых без образования токсинов (т. е. все, кроме ВТ) дают наклоны обычно меньше 2. Мейнелл Дж. и Мейнелл Э. считают маловероятным, что b при таких патогенах может превышать 2, поскольку принято думать, что микроорганизмы действуют независимо друг от друга. Поэтому целесообразно постараться повысить b до 2, но выше этого уровня мало что можно выгадать от таких основательных мероприятий, как генетически обоснованная система селекции насекомых. Согласно Мартиньони и Шмиду, у тех видов насекомых, у которых существуют циклы массового размножения (градации), завершающиеся вирусными эпизоотиями, партии насекомых, собранные непосредственно перед самой эпизоотией, скорее всего дадут меньшие наклоны, чем насекомые, собранные после эпизоотии, когда популяции разрежены (таковы, например, колебания наклонов для Eucosma griseana и Phrygatiidia californica, табл. 59). Мейнелл Дж. и Мейнелл Э. и Бухер указывают, что в испытаниях химических инсектицидов b часто бывает высоким (6—20), и, таким образом, для патогенов, вырабатывающих токсины, можно ожидать значений b больше 2. В таблице 59 наклон для ВТ в большинстве случаев близок к 2, а в двух случаях — примерно к 5, причем для Bombyx mori b значительно колеблется в зависимости от штамма бактерии. Однако Роджерс получил значение, близкое к 2 (табл. 59), скармливая гусеницам Р. brassicae кристаллы почти без примеси спор, даже если каждое насекомое получало точно отмеренную дозу. Пендлтон, скармливая, подобно Роджерсу, гусеницам Philosamia cynthia кристаллы 11 различных штаммов, получил наклоны от 1,4 до 6,9 (в среднем 3,3). Пендлтон располагал очень ограниченными доказательствами в пользу того, что и колебания наклона были обусловлены бактериальным штаммом, а не различиями в партиях насекомых. Таким образом, хотя кристаллический токсин ВТ может иногда давать наклоны, значительно превышающие 2, это не всегда удавалось выявить. Экзотоксин ВТ давал главным образом наклоны, явно превышающие 2 (табл. 59).
В смысле точности испытания ВТ в искусственной среде, проводимые на Т. ni, превосходны вследствие крутого наклона кривых. Еще точнее испытания, проводимые Каваром на E. kuehniella, поскольку при небольших затратах труда можно использовать большие партии гусениц и получить наклон, слегка превышающий 2 (табл. 59) при 25 °C и еще более крутой при 30 °C, т. е. при температуре, близкой к максимальной, при которой гусеницы заканчивают развитие. Такое влияние высокой температуры может быть результатом ускорения метаболизма и интенсификации питания насекомого или более быстрого размножения бактерий.