18.09.2018
14.09.2018
13.08.2018
03.08.2018
01.08.2018
25.07.2018
25.07.2018
20.07.2018
20.07.2018
17.07.2018
Культуральные среды и регуляторы роста патогенов членистоногих
 21.06.2014

Концентрация водородных ионов (pH), осмотическое давление, парциальное давление кислорода, ионное равновесие и питательные вещества— все это важные факторы, учитываемые при составлении сред. Обзоры материалов по составу сред для культуры тканей насекомых имеются у Смита и Baгo, поэтому они здесь не будут обсуждаться, если это не связано с ростом клеток, долговечностью культур и упрощением состава сред.
Добавление экстрактов кольцевой или проторакальной желез увеличивало миграции клеток, митоз и долговечность культур тканей яичника шелковичных червей. Экстракты головного ганглия, проторакальной железы и прилежащего тела усиливали формирование пузырька и тканевого зачатка и миграцию клеток у эксплантатов конечности таракана Leucophaea maderae. Добавление гормона экдизона к имагинальным дискам вощинной огневки, Galleria mellonella, усиливало рост и долю культур, в которых in vitro проявлялся метаморфоз. Добавление экдизона также благотворно действовало на культуры глазных имагинальных дисков D. melanogaster.
Сыворотки позвоночных и экстракты куриных эмбрионов, в свою очередь, благотворно влияли на культуры клеток и тканей насекомых in vitro. Простая среда, содержащая соли, трегалозу, эстрадиол и экстракт куриного эмбриона, стимулирующий рост, применялась в культурах тканей сердца, гонад и зрелых тканей падальной мухи Calliphora erythrocephala и слюнных желез D. melanogaster. Китамура (показал, что телячья сыворотка стимулировала миграцию клеток и поддерживала слои здоровых клеток в первичных эксплантатах комара Culex pipiens. Телячья сыворотка обеспечивала лучшие результаты, чем куриная плазма или бычья сыворотка. Мартиньони и Скаллион нашли, что эмбриональная сыворотка крупного рогатого скота создавала лучшие условия для роста гемоцитов Р. saucia, чем сыворотки человека, ягненка или лошади. Линия клеток Heliothis, выращиваемая без гемолимфы, лучше развивалась в эмбриональной бычьей сыворотке, чем в сыворотках человека, крупного рогатого скота, кроликов, морских свинок, крыс или кур . Эмбриональная бычья сыворотка улучшала также рост линий клеток Antheraea eucalypti, Aedes aegypti и В. mori, полученных Грейсом. Соединения, стимулирующие рост клеток позвоночных, можно использовать и при культуре линий клеток насекомых. Метиловые и пролиловые парабены стимулировали рост культур органов. Для максимального роста L-клеток требовались металлы из группы микроэлементов. Фетуин стимулировал разрастание различных клеток млекопитающих. Инсулин стимулировал разрастание клеток карциномы грудной железы у крыс, а диметилнитрозамин усиливал рост и увеличивал долговечность клеток эмбриона хомяка.
До 1960 г. в среды для культуры тканей насекомых добавляли гемолимфу насекомых других видов или того же вида. В методическом отношении большим шагом вперед была замена гемолимфы сыворотками или экстрактами позвоночных. Сыворотки позвоночных или экстракты куриных эмбрионов обеспечивали рост гемоцитов и гонад в отсутствие гемолимфы насекомых. Однако на средах без гемолимфы культуры не выживали так долго, как в присутствии гемолимфы. Ткани яичников В. mori образовывали клеточные выросты на среде без гемолимфы, содержащей соли, сахара, гидролизат лактоальбумина и дрожжевой экстракт. Длительной культуры клеток на среде без гемолимфы добились впервые Хорикава и др. В настоящее время многие линии клеток насекомых выращивают на средах без гемолимфы (табл. 49). Линии клеток A. eucalypti и A. aegypti, полученные впервые Грейсом на средах с гемолимфой, были адаптированы к средам без гемолимфы и успешно разрастались на них. С 1969 г. на этих средах были получены и удержались субкультуры клеток примерно 10 видов насекомых. Крупным достижением в культуре тканей насекомых была замена отдельных аминокислот и витаминов гидролизатами белка и дрожжевыми экстрактами.

Культуральные среды и регуляторы роста патогенов членистоногих

Для создания оптимальных сред для культуры тканей членистоногих и их упрощения необходимо изучать метаболизм культивируемых клеток насекомых. Для роста клеток насекомых in vivo, видимо, необходима трегалоза — сахар, содержащийся в гемолимфе насекомых. Однако одна из линий клеток A. eucalypti использовала глюкозу так же легко, как трегалозу. Холестерол, необходимый для роста in vivo, не требуется клеткам, развивающимся in vitro. Насекомые не синтезируют гистидин, треонин и триптофан, однако в искусственной культуре клетки насекомых синтезируют значительные количества этих соединений. Гемолимфа насекомых содержит высокие концентрации аминокислот, но культурам тканей цикадки аминокислоты требуются в меньших концентрациях, чем те, в которых они нормально содержатся в гемолимфе.