Пригодность спор из культур на искусственной среде
21.06.2014
Споры, образовавшиеся в колониях, заражают личинок японского жука при инъекции и не заражают их при скармливании. Штаммы, наиболее интенсивно опорулирующие in vitro, в личинках образуют споры в количествах меньше обычных; это свойство может замедлить распространение болезни. Однако возможность производства больших количеств дешевых спор путем ферментации может снизить относительное значение этого отрицательного свойства. Кроме того, давление отбора в организме насекомого должно в последующем вызвать появление в больных личинках штаммов с соответствующими патогенными свойствами.
Чтобы закрепить болезнь и обеспечить постоянное уничтожение вредителя, споры В. popilliae должны выживать в почве в течение ряда лет. Предполагается, однако, что споры должны прорасти, прежде чем сможет произойти заражение, хотя ни путь, ни механизм инвазии из кишечника в полость тела неизвестны. Если споры прорастают преждевременно, т. е. на месте проникновения в восприимчивого хозяина, микроорганизм погибает, так как вегетативные клетки могут выживать или вновь спорулировать только в гемолимфе. Поэтому непременный признак инфекционных спор В. popilliae — их способность к прорастанию только в специфических условиях. В искусственной среде прорастает обычно менее 1% спор, образовавшихся в больных личинках. В личинках прорастание также ограниченно, поскольку для того, чтобы вызвать сравнимое заражение, требуется ввести по крайней мере в 1000 раз больше спор, чем вегетативных клеток. Таким образом, чтобы добиться существенного подавления вредителя, в почву следует вносить большие количества спор. В настоящее время испытания показывают, что для заражения 50% и более личинок требуется внести 10в7 и 10в9 спор на 1 г почвы.
Споры, образованные в искусственной среде, прорастают быстрее, чем споры из гемолимфы. Потребность в инокулюмах, приготовленных из спор, автоматически приводит к отбору штаммов с наиболее хорошо прорастающими спорами. Вполне вероятно, что причиной неэффективности при пероральном введении спор, образовавшихся in vitro, является их преждевременное прорастание в кишечнике личинок или во влажной почве. Таким образом, потерю инфекционности можно приписать изменениям свойств, не связанных с инвазионностью патогенов, и инфекционность может быть утрачена потому, что некоторые свойства, необходимые для культуры на искусственных средах, противоположны свойствам, требуемым для заражения.
Вследствие изменчивости, присущей В. popilliae, отбор специфичных штаммов, объединяющих желательные признаки спорообразования, стойкости и инфекционности, видимо, является рациональным подходом к разработке методов крупномасштабного производства спор. Современные методы и существующие штаммы не вполне пригодны, но изучение этих штаммов может дать необходимые сведения.
