01.09.2017
31.08.2017
08.08.2017
14.07.2017
06.07.2017
19.06.2017
19.06.2017
19.06.2017
15.06.2017
12.06.2017
Споруляция Bacillus popilliae в личинках
 21.06.2014

Споры представляют собой стабильную инфекционную форму, посредством которой «молочная болезнь» распространяется в природе. В течение 7—21-дневного периода развития болезни в гемолимфе накапливается около 5*10в9 спор на личинку (примерно 5*10в10 на 1 мл гемолимфы). Строение спор и стадии спорообразования в гемолимфе изучены при помощи электронного микроскопа. Цитология спорообразования у В. popilliae сходна с описанной для других бактерий. Споры В. popilliae и В. lentlmorbus неизменно заключены в спорангий, который образуется без сильных изменений, из оболочки вегетативной клетки. При прорастании спор В. popilliae ростовая трубочка вытягивается, прорывая спору и спорангий, после чего делится, образуя первичную вегетативную клетку. Выпячивание происходит обычно на конце споры, противоположном параспоре; параспора становится темной в фазово-контрастном микроскопе и по завершении прорастания исчезает.
Накапливается все больше доказательств, что в период вегетативного роста в гемолимфе значительная доля клеток никогда не образует спор. В первые 3—4 дня после заражения гемолимфа содержит только вегетативные клетки. Для промежуточных стадий характерно одновременное присутствие вегетативных клеток, предспор и спор. Число вегетативных клеток никогда не превышает 1—3*10в9 на 1 мл гемолимфы и уменьшается по мере замещения предспорами и спорами. В течение всей болезни значительная, возможно, большая часть вегетативных клеток имеет зернистую структуру и почти лишена цитоплазмы; возможно, эти клетки мертвы. Большинство явно спорулирующих клеток остаются темными в фазово-контрастном микроскопе и, по-видимому, живыми, хотя их гибель может произойти на любой стадии до сформирования зрелой споры. Мертвые вегетативные клетки разрушаются или удаляются из гемолимфы предположительно в результате фагоцитоза или лизиса. Соответственно в больных личинках свыше 90% клеток составляют споры. Накопление спор в темолимфе происходит скорее в результате медленного и непрерывного размножения и споруляции умеренно вирулентных штаммов, чем в результате длительной фазы только вегетативного роста, за которой следует синхронная споруляция во всей популяции.
Из наблюдений над образованием спор в личинках вытекают три соображения, решающие для разработки способов производства спор.
1. Гемолимфа личинок может оказаться относительно скудной средой для споруляции бактерий — возбудителей «молочной болезни».
2. Штаммы В. popilliae, наиболее пригодные по скорости роста и споруляции для производства in vitro, могут оказаться относительно непригодными для борьбы с насекомыми, потому что они будут убивать личинок преждевременно, не образовав достаточно спор для распространения болезни в поле.
3. Окончательный метод производства спор in vitro может включать непрерывную культуру патогена в разных условиях для фаз роста и споруляции, или метод диализа, который непрерывно удаляет метаболиты и пополняет запасы питательных веществ, имитируя жизненные процессы в организме хозяина.