Измерение активности Bacillus thuringiensis

 21.06.2014

Подсчет жизнеспособных спор

Споры ВТ устойчивы к пастеризации. Подсчеты числа жизнеспособных спор производятся большей частью в суспензиях спор, подвергавшихся 10—15 мин воздействию 65 °С. В некоторых случаях, чтобы вызвать прорастание, необходимо подвергнуть споры так называемому «тепловому шоку», т. е. кратковременному воздействию 80 °C.
Комплекс спора-кристалл

а. Единица разведения в искусственной среде (ЕРС50). Единица разведения в искусственной среде — это величина, обратная ЛД50, определяемая как концентрация образца в искусственной питательной среде. В отсутствие эталона единица разведения в искусственной среде может быть очень полезной, поскольку она колеблется прямо пропорционально активности препарата и допускает непосредственное сравнение общих активностей жидких и твердых препаратов. Однако недостатком EPC50, как и ЛД50, является ее зависимость от вида и возраста используемого насекомого, в связи с чем на нее нельзя полагаться для сравнения независимых наблюдений, проводимых в ходе не связанных между собой испытаний.
б. Международная единица (ME), В 1966 г. в Вагенингене, Нидерланды, рабочая группа предложила определять активность кристалла ВТ путем биоиспытаний, в которых ЛД50 неизученных образцов ВТ сравнивались бы со стандартом. В качестве первичного стандарта был предложен Е-61, материал, приготовленный в Институте Пастера в Париже, Франция, активность которого определена в 1000 МЕ/мг. Таким образом, активность образцов ВТ можно было бы выражать числом международных единиц в миллиграммах по отношению к этому стандарту.
Использование стандарта предупреждает помехи от переменных, присущих испытаниям, связанным с разведением субстрата, и поэтому при наличии стандарта следует пользоваться международной единицей.
Термостойкий экзотоксин

Экзотоксин предупреждает превращение личинок мух во взрослые формы, и поэтому биоиспытания токсина проводятся обычно на этом насекомом. Активность испытываемого образца можно выразить в форме концентрации ЛК50, вычисленной по весу чистого токсина, поскольку чистый токсин уже выделен и имеются его эталоны.