01.09.2017
31.08.2017
08.08.2017
14.07.2017
06.07.2017
19.06.2017
19.06.2017
19.06.2017
15.06.2017
12.06.2017
Хроматографические методы разделения полипептидов кристаллического белка В. thuringiensis
 20.06.2014

Хроматографический метод разделения по молекулярным весам, или гельфильтрация, применялся для приготовления белковых фракций с узкими пределами молекулярного веса. Ватанабе и др. нашли, что кристаллы в растворе с pH 11,5 и хроматографированные при pH 7,8 в 0,1 M фосфатном буфере разделялись на два токсичных компонента. Однако эти компоненты были скорее второстепенными, а не главными компонентами исходного раствора. Они изучали В. thuringiensis var. sotto. Кукси получил сходные результаты для изолята Маттеса с той разницей, что токсичные компоненты были главными и различались иммунологически. Сомервилл и др., работавшие с В. thuringiensis var. alesti (изолят anduze), установили, что белок отделялся на сефадексе G-100 и G-200 (но о биологичеокой активности фракций не сообщали). DEAE-целлюлоза применялась во всех трех исследованиях для последующей очистки. Результаты Сомервилла и др. свидетельствуют о трудности работы с растворенным кристаллическим белком. Они пытались хроматографировать кристаллический белок на DEAE-целлюлозе, уравновешенной 0,01 M tris-HCl при pH 8,3. Фракция (I) белка элюировалась 0,4 M (NH4)2CO3 в 0,01 M tris-HCl, а вторая фракция (II) — 0,1 н. NaOH. После концентрирования путем лиофилизации и повторной хроматографии каждая фракция давала тот же профиль элюирования. Обе исходные фракции и фракции, полученные из них в результате повторной хроматографии, вели себя одинаково в иммунодиффузионном тесте. Такое поведение служит хорошим доказательством обратимой агрегации. Профиль элюции очень напоминал тот, который описывали Ватанабе и др., и, видимо, не представлял настоящую ионообменную хроматографию, а скорее общую десорбцию белка вслед за применением каждого растворителя. Недавно Кукси (неопубликованные данные) разделил два главных антигена кристаллического белка изолята Маттеса В. thuringiensis var. thuringiensis на DEAE-целлюлозе при pH 9 в 0,05 M глицин — NaOH, содержащем 10в3 M p-меркаптоэтанола при градиенте NaCl от 0 до 0,2 M (рис. 12). Антиген, характерный для штамма Маттеса, был совершенно свободен от второго антигена. При скармливании гусеницам Р. brassicae обе фракции оказались токсичными. Этот метод дает возможность изучать отдельные антигены кристалла, как отдельные белки.