07.11.2017
31.10.2017
21.10.2017
21.10.2017
21.10.2017
04.10.2017
04.10.2017
28.09.2017
01.09.2017
31.08.2017
Физические методики и химическое видоизменение белка В. thuringiensis
 20.06.2014

Одна из трудностей работы с раствором кристаллического белка заключается в сохранении его в растворе. Известно, что белок претерпевает обратимую аггрегацию субъединиц. Это означает, что белковые цепи, освобождающиеся в результате разрыва водородной и дисульфидной связей, вновь агрегируются в более крупные образования, которые в конце концов осаждаются. Этим можно объяснить первоначальные затруднения автора при использовании ионообменной хроматографии. Лекадэ до некоторой степени разрешила проблему реагрегации путем алкилирования свободных сульфгидрильных связей р-ртутьхлорбензоатом. Кукси использовал для той же цели иодацетамид. Интересно отметить, что алкилированный белок, свободный от неалкилированного белка, реагирует с антисывороткой к неалкилированному растворимому белку.
Используя ультрацентрифугу, Лекадэ обнаружила в алкилированном белке четыре компонента, соотношение которых менялось в зависимости от предварительной обработки препаратов — результат, который можно, вероятно, объяснить явлением обратимой ассоциации — диссоциации. Коэффициенты осаждения составляли примерно 0,8S, 5S, 9S и 27S. В общем доля пиков медленного осаждения увеличивалась, когда кристаллы дольше обрабатывались восстановителями. Коэффициент 0,83S соответствует полипептиду с молекулярным весом около 10 000. Холмс и Монро обнаружили аналогичные фракции (0,8S и 4,1S), так же как и Кукси (1,1S и 5S). Ватанабе и др. получили несколько иные результаты (2,8S и 3,8S) при работе с В. thuringiensis var. sotto в сравнении с изолятами var. thuringiensis, которых использовали другие исследователи. Только одна Лекадэ сообщила о значительных количествах материала, коэффициенты седиментации которого превышали 5S. Вероятно, эти различия частично объясняются использованием разных растворителей. Ватанабе и др. растворяли кристалл в NaOH, в то время как Лекадэ и Кукси использовали карбонатные буферы с восстановителями. Ватанабе и др. применяли фосфатный буфер с pH 7,8 и 0,5 M мочевины в пробирке ультрацентрифуги, где должна была произойти частичная реассоциация белковых субъединиц. Этим, вероятно, и объясняется отсутствие компонента 1S в его системе.