Зависимость между антигенностью и токсичностью кристаллического белка токсина В. thuringiensis

20.06.2014

Учитывая приведенные выше замечания о пригодности иммунологии для обнаружения кристаллического белка, особенно важно иметь уверенность в том, что антигенное свойство кристалла связано с его токсическим действием. Любой биохимический метод фракционирования кристаллического белка, использующий систему иммунологических испытаний, не был бы действительным, если бы эти два параметра не были связаны. Ряд исследователей опубликовали работы в этой области. Одна из них о возможности замены токсикологического испытания иммунологическим представляет практический интерес. Чтобы исследовать пригодность кристаллоносного энтомопатогена для борьбы с вредным насекомым, нужно провести биологическое испытание с использованием намеченного насекомого и патогена. Если восприимчивость насекомого к различным антигенам, присущим описанному ранее штамму, известна, то токсикологическое испытание можно заменить иммунологическим, сэкономив тем самым время и силы. Ho эта возможность зависит от лучшего знания кристалла В. thuringiensis, чем то, которым мы в настоящее время располагаем. Однако, как мы увидим, зависимость между токсичностью и антигенной (серологической) реакцией хорошо доказана. Кривьенчик и Ангус доказали, что три разновидности В. thuringiensis — var. thuringiensis (berliner), sotto и entomocidus — содержали общий антиген. Если этот антиген удаляли осаждением антисывороткой, то белок в надосадочной жидкости был нетоксичен. Однако они отмечали, что серологически штаммы были совершенно различны. Более позднее исследование Кукси показало наличие количественной зависимости между концентрацией конкретного антигена в препарате растворенного кристалла из изолята Маттеса В. thuringiensis и токсическими свойствами того же препарата. Количественный иммунологический тест был основан на методе простой диффузии Манчини и др. Имеется ряд других количественных иммунологических тестов, которые можно применять при анализе кристаллического антигена.
Серология фракций кристаллического белка, приготовленных путем протеолиза, привлекала меньше внимания, чем серология непереваренного кристаллического белка. В дополнение к проверке 93 изолятов В. thuringiensis на серотип интактного кристалла Пендлтон и Моррисон провели сравнение тех же изолятов на основе серологии переваренных кристаллов. Кристаллы подвергались перевариванию in vitro отрыгнутыми кишечными ферментами Pieris brassicae, после чего проверялась их реакция с антисыворотками, приготовленными к очищенным целым кристаллам. Оказалось, что антигенный характер во многих случаях изменялся по сравнению с непереваренными кристаллами. Одни антигены исчезали, другие появлялись, а антиген «i» был весьма частым компонентом серотипа переваренного кристалла. С другой стороны, Кривьенчик и Ангус обнаружили гораздо больше антигенов, чем Пендлтон. При взаимодействии растворимого кристаллического белка с гомологичной антисывороткой они обнаружили пять линий преципитации. При использовании гетерологичных антисывороток было обнаружено меньше линий преципитации. Так, например, растворенный белок В. thuringiensis var. sotto при взаимодействии с гомологичной антисывороткой дал пять линий, а при использовании антисыворотки к кристаллическому белку В. thuringiensis var. thuringiensis (berliner) было обнаружено только два антигена.