04.10.2017
04.10.2017
28.09.2017
01.09.2017
31.08.2017
08.08.2017
14.07.2017
06.07.2017
19.06.2017
19.06.2017
Производство инфекционного материала в борьбе с насекомыми
 20.06.2014

1. Методы культуры

При массовой культуре гриба для микробиологической борьбы важнейшее значение имеет выбор штаммов, сохраняющих in vitro высокую степень вирулентности и отличающихся хорошим ростом и развитием при обильном спорообразовании. Выход спор часто определяется типом среды, используемой для культуры гриба.
В настоящее время разработаны успешные методы массового производства спор Beauveria и Metarrhizium. Основным культуральным субстратом служили обычно пшеничные, кукурузные или картофельные продукты. Мюллер-Кёглер указывает, что на рыхлых субстратах (отрубях или кукурузном зерне) выход спор выше, чем на плотных, типа агара, поскольку число спор на единицу веса среды зависит от площади поверхности среды. В настоящее время применяются три основных способа массового производства спор В. bassiana: 1) размножение на плотных (твердых) питательных средах в стерильных условиях при естественной аэрации; этот способ пригоден только для производства гриба в небольших масштабах в лаборатории; 2) выращивание в полустерильных условиях на жидких, тестообразных и твердых питательных средах в плоских сосудах различных размеров. Этот метод можно удовлетворительно использовать для производства инфекционного материала в количествах, достаточных для проведения лабораторных и полевых опытов; 3) производство в жидких средах на качалках или в чанах промышленного типа с искусственной аэрацией. После выращивания гриба в погруженных культурах было предложено размещать его в мелких (неглубоких) сосудах для производства спор.
Некоторые энтомопатогенные грибы диморфны и при выращивании в погруженных культурах на качалках в условиях аэрации образуют вместо мицелия дрожжевидные клетки. Эти дрожжевидные клетки называются бластоспорами, и их можно относительно быстро получать в массовых количествах. Недостатком с точки зрения микробиологической борьбы является меньшая долговечность высушенных бластоспор по сравнению с конидиями. Массовую культуру бластоспор применяют в производстве В. bassiana, В. tenella, М. anisopliae, Spicaria prasina и Poecilomyces (Spicaria) farinosus.
2. Поддержание и усиление вирулентности

Вирулентность энтомопатогенных грибов, например ряда видов мюскардины, может снизиться или совершенно исчезнуть в результате повторной культуры на искусственных средах. Это лучше всего видно на примере В. bassiana, у которой снижение вирулентности началось после 16 пересевов, а образование токсина уменьшилось после повторного культивирования. С другой стороны, бурые штаммы М. anisopliae сохраняли вирулентность после 7 и 30 лет (число пересевов неизвестно) культуры на искусственных средах. Виды Entomophthora, обладающие широким кругом хозяев, например E. coronata, сохраняют вирулентность на протяжении длительных периодов.
В большинстве случаев вирулентность теряется не полностью, а только снижается и может быть восстановлена до первоначального высокого уровня путем пассажа через насекомых-хозяев. Механизм потери и восстановления неизвестен, но наличие такого явления у односпоровых культур показывает, что оно осуществляется не в результате отбора специальных генотипов, как это могло быть в смешанных культурах. Поскольку на искусственных средах вирулентность может снизиться, опоры, полученные вскоре после выделения гриба из зараженных насекомых, следует сохранять для посева и дальнейшего производства спор. Это можно осуществить, применяя низкие температуры, высушивание или снижение содержания кислорода.
Для поддержания вирулентности было предложено вводить лярд (животные жиры) в питательные субстраты или на их поверхность. Добавление различных химических веществ, например инсектицидов или хитина, а также и более стандартные воздействия, например облучение спор, вызывало, по-видимому, появление стойких мутантов с повышенной вирулентностью. Попыток изменить вирулентность путем генетической перекомбинации различных штаммов энтомопатогенных грибов не предпринималось. Поскольку совершенная стадия отсутствует, для работы с несовершенными грибами могут оказаться пригодными митотические рекомбинации.
Повышение вирулентности — особенно запущенная область в исследованиях энтомопатогенных грибов. В настоящее время используются почти исключительно штаммы, встречающиеся в природе, тогда как в некоторых условиях специально выведенные штаммы, несомненно, были бы более пригодны для микробиологической борьбы.
3. Хранение

Проверка жизнеспособности спор в период хранения часто производится без количественного учета. При этом простое разделение спор на живые и мертвые может создать ошибочное представление, поскольку сильные культуры разовьются при обычных штриховых разводках, даже если жизнеспособных спор в инокулуме будет менее 10%. Использование материала с низкой жизнеспособностью для микробиологической борьбы фактически бесполезно; поэтому процент жизнеспособных спор в биопрепаратах следует определять до их применения. Как указывалось выше, долговечность спор зависит от температуры, влажности, газового состава атмосферы и, вероятно, от света в период хранения. Если для гарантии высокой жизнеспособности спор нельзя применить такие дорогостоящие методы хранения, как экстремальный холод или лиофилизация, споры нужно использовать в течение немногих недель или месяцев после их получения. Кроме того, если это возможно, споры нужно хранить до использования при 4 °С. Если споры заморожены, их следует быстро разморозить. Гибель спор в результате неправильного хранения является, вероятно, причиной некоторых неудач три использовании грибов в микробиологической борьбе.
4. Состав препаратов

Споры можно применять в форме дустов, жидких препаратов или гранул. Лучшая форма биопрепарата зависит прежде всего от вида гриба. Некоторое преимущество дустов в том, что их можно хранить в виде готовых препаратов, а вихревое движение частиц в струе воздуха из опыливателя способствует их прилипанию как к верхней, так и к нижней поверхности листьев. Очень осторожно нужно выбирать наполнитель, поскольку некоторые материалы подавляют прорастание спор. В качестве наполнителей для дустов пригодны тальк, мука и молочный порошок.
Водные препараты спор В. bassiana, как правило, нельзя использовать без добавления смачивателей, причем рекомендуется предварительно проверить влияние последнего на жизнеспособность спор. Холл указывал, что неудача опыта с заражением гусениц Crambus спорами В. bassiana была обусловлена смачивателем. К числу пригодных соединений относятся тритон Х-100 и поверхностно-активный препарат фирмы Дю-Пон со спорами Spicaria rileyi. Тритон X-155 и моющий порошок Тренд в количестве 1 % заметного вредного действия на споры В. bassiana не оказывали.
Йорк установил, что использование спор В. bassiana против кукурузного стеблевого мотылька в виде гранул (с кукурузной мукой, или аттапульгит) дает лучшие результаты, чем жидкие препараты или дусты.
При приготовлении препаратов энтомопатогенных грибов особого внимания заслуживают соединения, защищающие споры от ультрафиолетовой части солнечного света, повышают влажность в микроклимате споры и не оказывают аллергенного действия. Инкапсулирование, которое предположительно могло бы удовлетворить некоторым из перечисленных требований, для грибов, видимо, не применялось.