01.09.2017
31.08.2017
08.08.2017
14.07.2017
06.07.2017
19.06.2017
19.06.2017
19.06.2017
15.06.2017
12.06.2017
Вирусы
 20.06.2014

Ткань хозяина, пораженного вирусом, можно изучать в водных препаратах, пользуясь световой микроскопией в светлом и темном поле и фазово-контрастной микроскопией или в мазках после окрашивания их раствором Гимза с предварительной обработкой 0,1%-ной HCl, или 0,1%-ным NaOH, или без нее. Окрашенные ультратонкие срезы образцов ткани или окрашенные осадки после центрифугирования мацерированных тканей и клеток можно исследовать на сетках электронного микроскопа.
Большинство вирусов, заражающих беспозвоночных, в частности личинок насекомых, характеризуется тем, что вирусные частицы (вирионы) включены в особые тельца; отсюда термины «inclusion» viruses или «occluded» viruses. Тельца-включения — полиэдры, гранулы, или капсулы и мелкие шаровидные включения — размещаются в ядрах или цитоплазме клеток жировой ткани, кишечника, гиподермы, мышц и других тканей. Типы вирусов, у которых вирусные частицы не собраны во включения, называются голыми (non-inclusion или non-occluded viruses). Включения не окрашиваются раствором Судана III. Раствор Гимза окрашивает их только после предварительной обработки в течение 2,5 мин 0,1%-ной НСl или 0,1%-ной NaOH. После предварительной обработки раствор Гимза окрашивает включения в голубоватый цвет с мельчайшими красными участками во внутренней части. При исследовании влажных препаратов в темном поле микроскопа включения преломляют свет и кажутся светлыми. Вирусные частицы видны во включениях под электронным микроскопом в тонких срезах. Включения из ткани умирающего хозяина, из мертвой или сухой ткани, а также центрифугат можно фиксировать 2%-ной осмиевой кислотой и заливать эпоксидной смолой (например, эпон) для приготовления срезов для электронно-микроскопических исследований. Вирусные частицы, освобожденные из включений, гранулы, полиэдры или голые вирусы в тканевых вытяжках или в гемолимфе можно видеть на сетке электронного микроскопа, в суспензии, разведенной дистиллированной водой. Через 5 мин воду с сетки отсасывают, на 1 с добавляют и затем отсасывают одну каплю 2%-ного уксуснокислого уранила или напыливают сетку микроскопа тяжелым металлом, например палладием. При малых увеличениях, примерно Х8000, видны вирусные частицы, гранулы или полиэдры.
На сетке, подготовленной аналогичным образом и обработанной 0,1%-ным NaOH для растворения включений, при последующем напыливании можно видеть остатки включений и внутри них или на поверхности связанные с ними вирусные частицы. Смит приводит описания энтомопатогенных вирусов.

1. Ядерный полиэдроз (из группы borrelinavirus) образует включения

Описание и методика. Хозяин: гусеницы бабочек. Симптомы: насекомые свисают с субстрата, содержимое тела разжижено, хрупкие покровы разрываются. Местонахождение в тканях: жировое тело, гиподерма, трахейная матрица, гемоциты, по мере развития заражения — другие ткани. Морфология патогена: субсферические полиэдры диаметром 3—7 мк, группами в гипертрофированных ядрах; вирусные частицы палочковидные, 350X50 ммк. Световая микроскопия: без предварительной обработки 0,1%-ным NaOH или горячей 0,1%-ной HCl полиэдры не окрашиваются; после обработки раствор Гимза окрашивает полиэдры в темный цвет, другие клеточные включения или структуры хозяина — в светлый. Электронная микросколия: палочковидные вирусные частицы в полиэдрах, растворяющихся на сетке, или в ультратонких срезах. Нуклеиновая кислота: ДНК и РНК.
2. Ядерный полиэдроз (из группы birdiavirus) образует включения

Методика и демонстрация. Хозяин: перепончатокрылые. Личинки пилильщиков. Симптомы: зараженные насекомые приклеиваются к субстрату анальным отверстием и конечностями, вялые, содержимое тела частично разжиженное, оболочки хрупкие. Местонахождение в тканях: эпителий средней кишки, гипертрофированные ядра клеток. Морфология патогена: мельчайшие, почти шаровидные полиэдры, 0,5—1,2 мк в диаметре, вирусные частицы 250X50 ммк, нередко шаровидные. Световая микроскопия: обработка 0,1%-ным едким натром или горячей 0,1%-ной соляной кислотой облегчает контрастную окраску. Электронная микроскопия: в полиэдрах на срезах или после их растворения видны палочковидные вирусные частицы. Нуклеиновая кислота: ДНК.
3. Гранулез (капсулы) (из группы bergoldiavirus) образует включения

Методика и демонстрация. Хозяин: гусеницы бабочек. Симптомы: зараженные насекомые белые, гемолимфа молочно-белая, часто хрупкие покровы и разжиженное содержимое тела. Местонахождение в тканях: жировое тело, гиподерма, позднее другие ткани. Заражение может ограничиться какой-либо одной тканью. Морфология патогена: гранулы (капсулы) яйцевидные, 0,3—0,5х0,1 — 0,2 мк, или кубовидные, причем некоторые могут в наибольшем измерении достигать 5,0 мк. Вирусные частицы палочковидные, 400х50 ммк. Световая микроскопия: на границе разрешающей способности микроскопа частицы вируса в массе преломляют свет в темном поле; при нормальной микроскопии окрашены в серый цвет; в гипертрофированных ядрах и в шаровидных внутри- и внеклеточных пузырьках. Электронная микроскопия: после растворения в щелочах в каждой грануле видна одна вирусная палочка. Нуклеиновая кислота: ДНК.
4. Эластовирус из группы xerosiavirus (включения полиэдрические)

Описание и демонстрация, фагоцитоз, методика: хозяин: двукрылые личинки долгоножек. Симптомы: лимфоциты хозяина гипертрофированы, на поверхности ядер серповидные включения, гемолимфа молочно-белая, тело вялое. Местонахождение в тканях: лимфоциты. Морфология патогена: полиэдры, свободно плавающие в гемолимфе, 5,7х3,5 мк. После введения под покровное стекло капли 4%-ного NaOH превращаются в сигмовидные нити длиной до 30 мк. Нейтрализация восстанавливает их первоначальную форму. Длина вирусной частицы 160 ммк. Электронная микроскопия: в ультратонких срезах видны палочковидные вирусные частицы. Нуклеиновая кислота: ДНК.
5. Цитоплазменный полиэдроз (из группы smithiavirus) образует включения

Хозяин: бабочки, двукрылые (Culicidae, Culex tarsalis). Симптомы: у бабочек гусеницы хозяина активны; кишечник твердый, белый, гипертрофированный; экскременты мелового цвета, содержат массы полиэдров. У двукрылых личинки вялые, инертные, с трудом удерживаются у поверхности воды. Местонахождение в тканях: у бабочек — клетки средней кишки; у Culex tarsalis клетки гиподермы и имагинальные диски. Морфология патогена: размер полиэдров в одной и той же клетке колеблется от 1 до 7 мк. Вирусные частицы шаровидные, 50—70 ммк. Световая микроскопия: многочисленные полиэдры в клетках стенок кишечника, отдельные полиэдры в вакуолях. Полиэдры окрашиваются раствором Гимза после обработки щелочами. Электронная микроскопия: в срезах хорошо видны полиэдры с круглыми углублениями на поверхности; после растворения видны шаровидные вирусные частицы в скоплениях полиэдров, напоминающих пчелиные соты. Нуклеиновая кислота: РНК
6. Цитоплазменный вирус, образующий веретеновидные включения (из группы vagoiavirus)

Описание и демонстрация. Хозяева: бабочки и жуки. Симптомы: тело хозяина мелового цвета, твердое, насекомые неподвижны на субстрате. Местонахождение в тканях: жировое тело. Морфология патогена: на ранних стадиях болезни включения от игловидной до веретеновидной формы. Окончательная форма включений овальная, 0,7—13x0,7—6 мк, вирусные частицы яйцевидные, 400X250 ммк. Световая микроскопия: в цитоплазме окрашиваются включения с формой от игловидной до веретеновидной, конечные овальные стадии их окрашиваются только после обработки щелочью, позволяющей выявить многочисленные гранулы, преломляющие свет в темном поле. Ядра не затронуты. Электронная микроскопия: в ультратонких срезах и в тканевом осадке на сетках электронного микроскопа видны яйцевидные вирусные частицы с бугорчатой поверхностью. Нуклеиновая кислота: неизвестна.
7. Вирусы сходные с вирусом оспы, образуют включения

Методика и демонстрация. Хозяин: личинки двукрылых, бабочек и жуков. Симптомы: у бабочек — паралич брюшной области. Местонахождение в тканях: цитоплазма жировой ткани и гемоцитов. Морфология патогена: вирусные частицы яйцевидные, 25х10 ммк, поверхность бугорчатая, содержит овальные включения, напоминающие ядра, 4—10 мк. Световая микроскопия: в жировом теле белые неправильной формы цисты. Цитоплазма вокруг ядер в клетках заполнена включениями от овальной до кубической формы, которые преломляют свет в темном поле и окрашиваются раствором Гимза после обработки щелочью. Электронная микроскопия: в ультратонких срезах видны вирусные частицы, имеющие форму подушек. Нуклеиновая кислота: неизвестна.
8. Вирус кобылок, образующий включения

Патология и развитие. Хозяин: прямокрылые Melanoplus sanguinipes, М. bivittatus, М. differentialis, Schistocerca americana. Симптомы: высокая смертность, общее оцепенение, задержка развития, гипертрофия жировой ткани, сопровождающаяся растяжением брюшка личинок старших возрастов, при сильном заражении гемолимфа мутная. Местонахождение в тканях: жировая ткань, цитоплазма и ядра; инфекции — от сублетальной до летальной (конечной) — охватывают изолированные части или целый орган. Морфология патогена: кристаллические включения, неправильной кубовидной формы, 2—10 мк в наибольшем измерении. Вирусные палочки, 200— 400 ммк. Световая микроскопия: включения, нерастворимые в воде, растворяются в 1%-ном КОН. Электронная микроскопия: тонкие срезы через включения, вирусные частицы продолжают развиваться во время образования белковой оболочки внутри увеличивающихся полиэдров. Нуклеиновая кислота: ДНК.
9. Кристалловидный вирус, образует включения

Описание и методика. Хозяин: прямокрылые Melanoplus bivittatus, Acrididae. Симптомы: потеря аппетита, сил и координации Движений. Местонахождение в тканях: цитоплазма трахейной матрицы, мышцы и перикардиальные клетки. Морфология патогена: удлиненные кристаллические включения длиной 2—10 мк; вирусные частицы шаровидные, 13 ммк в диаметре. Световая микроскопия: мышцы атрофированы, полосатость исчезла, на концах мышечных волокон кристаллические включения. Электронная микроскопия: в тонких срезах через включения видны кристалловидные структуры в разных проекциях. Нуклеиновая кислота: РНК.
10. Денсонуклеоз и группа morator-virus; голые вирусы

Описание и демонстрация. Хозяин: гусеницы вощинной огневки (Galleria mellonella) и другие насекомые, например личинки и взрослые формы медоносной пчелы (Apis mellifera). Симптомы: мертвые личинки мягкие, от бурого до черного цвета; при мешотчатом расплоде живые личинки медоносной пчелы плавают в водянистой жидкости внутри сброшенных при линьке шкурок, взрослые пчелы парализованы. Местонахождение в тканях: ядра клеток жирового тела, у взрослых пчел нервные ганглии превращаются в плотные однородные массы. Морфология патогена: икосаэдры, 20—30 ммк. Световая микроскопия: вирусные частицы не видны, на срезах жировая ткань имеет вид плотных, темноокрашенных однородных масс, а ядра — гомогенных шаров. У пчел отмечаются аналогичные изменения в нервной ткани, ганглиях и в некоторых клетках желудочка. Электронная микроскопия: свободные икосаэдрические вирусные частицы в полостных жидкостях; заметны после фильтрования через микропористые фильтры (0,45 мк). Нуклеиновая кислота: ДНК.
11. Радужные голые вирусы из группы preudomorator-virus

Круг хозяев и развитие. Хозяин: личинки двукрылых и жуков, гусеницы бабочек. Симптомы: тело хозяина имеет голубоватозеленую, фиолетовую или коричневую радужную окраску: зараженные ткани не гипертрофированы, личинки вялые, прячутся. Местонахождение в тканях: шелкоотделительная железа, жировое тело, трахейный эпителий, эпидермис, мышцы. Морфология патогена: икосаэдрический вирус, 130—180 ммк в диаметре. Световая микроскопия: на срезах в тканях видны вирогенные стромы, окрашивающиеся в черный цвет и имеющие вид ноздреватых масс в цитоплазме, 3—8 мк в диаметре. Матта и Лоу составили обзор методов дифференциального окрашивания; так, ткань комара, зараженного вирусом, можно на срезах окрасить так, что в темном поле микроскопа она будет иметь темный красно-коричневый цвет. Электронная микроскопия: вирус в цитоплазме клеток жирового тела, гиподермы и некоторых мышечных клеток. Гемолимфа, разбавленная водой, содержит массы икосаэдрических вирусных частиц. Нуклеиновая кислота: ДНК.
12. Голые вирусы клещей

Хозяин: красный плодовый клещик, Panonychus ulmi, Р. citri — красный цитрусовый клещик. Симптомы: паралич хозяев; в полости тела зараженных Р. citri часто заметны кристаллы неправильной формы, с двойным лучепреломлением, 3—7 мк, или круглые тельца 50 мк в диаметре. Местонахождение в тканях: неизвестно. Морфология патогена: шаровидный, 50—60 ммк в диаметре. Электронная микроскопия: фильтрат растертых клещей, высушенный и притененный напыленным палладием. Нуклеиновая кислота: РНК.